PPV SC-1株VP2基因的定点突变及真核表达载体的构建

摘要：

以PPV VP2为基础,利用重叠延伸PCR技术分别将VP2蛋白中第402位(A)和214位(B)的半胱氨酸突变为精氨酸,并将突变体克隆入pMD19-T Simple载体中;经酶切、PCR和测序鉴定后,利用KpnⅠ和BamHⅠ酶切位点,定向克隆入真核表达载体pPI-2.EGFP中,构建突变体与报告基因EGFP融合表达的pPI-2.EGFP.VP2(A)和pPI-2.EGFP.VP2(B)真核表达载体;利用脂质体法将重组质粒分别转染COS-7细胞.结果:成功构建了突变体的真核表达载体;在转染后的荧光观察中发现,pPI-2.EGFP.VP2(A)和pPI-2.EGFP.VP2(B)质粒转染细胞后,两者表达后的荧光信号不同,A样品的荧光呈颗粒状分布于细胞中,而B样品的荧光信号均匀分布于细胞中.提示,突变是引起表达差异的主要原因.

关键词：猪细小病毒、VP2、基因、定点突变

所属期刊栏目：26

分类号：S852.659.2;Q786(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目30500019;四川省科技厅科技攻关项目

在线出版日期：2009-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：258-262