罗非鱼源无乳链球菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与原核表达

摘要：

为对罗非鱼源无乳链球菌ZQ0910株甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因进行克隆及表达进行研究，根据GenBank上已登录的相关基因设计引物，采用 PCR方法扩增该株细菌的甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因，然后将其定向克隆至原核表达载体pET-32a（＋）中，在大肠杆菌BL21（DE3）中进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达。结果显示，甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因有1011个碱基，编码336个氨基酸；同源基因序列比对显示，无乳链球菌ZQ0910株与无乳链球菌2603V/R的甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的同源性最高；经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达后，SDS-PAGE电泳显示甘油醛-3-磷酸脱氢酶蛋白表达的最优条件为：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷浓度为0．06 mmol/L、温度37℃、诱导5 h ，蛋白表达量最大；HisTrap HP柱纯化后融合蛋白的质量浓度为560μg/mL ；Western Blot验证甘油醛-3-磷酸脱氢酶的分子量为36．01 ku。研究结果表明，成功克隆与表达了甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因，这将为进一步研究甘油醛-3-磷酸脱氢酶的免疫原性及亚单位疫苗提供理论依据。

关键词：无乳链球菌、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因、克隆、原核表达

分类号：S917.1(水产基础科学)

资助基金：广东省科技计划项目2012B020308009．

在线出版日期：2014-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：175-180