低温肉制品中3种食源性致病菌多重聚合酶链式反应快速检测方法的建立

摘要：

针对低温肉制品中较易污染的沙门氏菌(Salmonella spp.)、单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等有害微生物,利用多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chainreaction,m-PCR)的方法,对3种菌同时快速检测,从而达到节省时间,提高效率的目的.使用沙门氏菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的Prf4基因和单增李斯特菌nuc基因设计3对特异性引物,在确定特异性引物的基础上,将3种菌进行培养增菌后接种于低温肉制品中,过夜富集后收集并进行灵敏度检测,优化多重PCR反应体系并应用于实际样品的检测.结果表明:多重PCR方法在同时检测这3种有害微生物时,m-PCR最佳反应条件如下:25 μL反应体系、10×PCR缓冲液2.5 μL、2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μL、2.5 U/μL的DNA聚合酶0.5 μL及上、下游引物各0.5 μL、单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的模板1.0 μL、沙门氏菌的模板2.0 μL,加ddH2O补足至25μL,最佳退火温度为64℃.多重PCR快速检测方法适用于低温肉制品中沙门氏菌等3种食源性致病菌的检测,具有快速、灵敏、特异、简便等特点.

关键词：低温肉制品、多重PCR、快速检测、食源性致病菌

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分类号：TS251.7(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金面上项目31571909;“十三五”国家重点研发计划重点项目2016YFD0400703-05

在线出版日期：2017-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：45-50