结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6-CFP10的融合表达及纯化

摘要：

目的在原核表达系统融合表达结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6和培养滤液蛋白CFP10的融合蛋白(rE6C)并纯化,测定抗原性和特异性.方法用将一个柔性的氨基酸"接头"插入原核表达载体pET32c(+)中,构建pET32c(+)-linker.PCR法扩增ESAT-6、CFP10基因.将ESAT-6克隆入改建的载体pET32c(+)的linker前,CFP10克隆入linker后,构建E6C融合基因,转化大肠杆菌XL1-blue,抽提质粒,酶切鉴定;在大肠杆菌BL21中表达,纯化rE6C蛋白,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测其抗原性和特异性.结果重组质粒pET32c(+)-ESAT-6-CFP10靶基因的测序结果与预计序列完全一致.携带重组质粒的菌株经诱导产生高水平的表达产物,纯化的表达产物具备较高的纯度、抗原性和特异性.结论pET32c(+)-ESAT-6-CFP10质粒在BL21菌中能高效表达,rE6C融合蛋白具有良好的抗原性和特异性,有望用于结核分枝杆菌感染的临床诊断.

关键词：结核分枝杆菌、抗原、重组、酶联免疫吸附测定

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分类号：R59;R1(全身性疾病)

资助基金：江苏省预防医学科研项目Y200424;江苏省徐州市科技计划x2004541

在线出版日期：2006-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：196-200,195