10.16073/j.cnki.cjcpt.2023.18.03
含有SAP结构域的肌肉增强因子2激活基因对肝细胞癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制
目的 探讨含有SAP结构域的肌肉增强因子2激活基因(MAMSTR)对肝细胞癌(HCC)预后的影响,以及对HCC细胞增殖和凋亡的作用和可能机制.方法 从TCGA数据库中获取369例HCC患者肿瘤组织和正常肝组织mRNA数据和相应临床信息.通过Wilcoxon检验分析MAMSTR基因在HCC组织和正常肝组织中的表达差异.通过Kaplan-Meier曲线和Cox回归模型分析MAMSTR与HCC患者预后的关系.应用基因功能富集分析(GSEA)检测MAMSTR在HCC中的潜在生物学功能.使用慢病毒包装质粒构建可诱导表达MAMSTR siRNA的HepG2肝癌细胞系.通过细胞计数、克隆形成和Caspase 3活性实验检测体外条件下MAMSTR对HCC细胞生长和凋亡的作用.使用蛋白质印迹、定量PCR实验分析MAMSTR影响HCC细胞凋亡的分子机制.通过转录因子分析MAMSTR对HCC生物学功能调控的可能信号通路.结果 与正常肝组织比较,MAMSTR基因在HCC组织中高表达,P<0.001;且其表达量与年龄和临床分期有关联,均P<0.05.生存分析显示,高表达MAMSTR组患者中位生存期较短,χ2=14.257,P<0.001.单因素(HR=1.302,95％CI为1.160～1.461)和多因素Cox回归模型(HR=1.265,95％CI为1.124～1.424)表明,MAMSTR可以作为HCC患者预后的独立危险因子,均P<0.001.单样本基因集富集分析(ssGSEA)分析发现,MAMSTR高表达组中CD56dim自然杀伤细胞(W=536,P=0.018)、效应记忆CD8+T细胞(W=576,P=0.048)、嗜酸性粒细胞(W=305,P<0.001)、1型辅助性调节T细胞(W=497,P=0.006)和17型辅助性调节T细胞(W=439,P<0.001)抗肿瘤免疫细胞出现下调.同时,促肿瘤免疫细胞记忆B细胞(W=1010,P=0.022)和2型辅助性调节T细胞(W=1191,P<0.001)上调.GSEA结果显示,MAMSTR可能调控E2F转录因子〔标准化富集分数(NES)=2.475,P<0.001〕、PI3K/Akt/mTOR(NES=1.438,P=0.002)等信号通路.定量PCR检测发现,敲低组细胞MAMSTR的相对表达量(0.624±0.006)明显低于对照组(1.000±0.010),差异有统计学意义,t=45.998,P<0.001.生长计数和克隆形成实验发现,敲低MAMSTR表达可以抑制HepG2细胞生长,t=11.372,P=0.008.Caspase 3活性实验结果显示,Dox(+)组细胞中Caspase 3相对活性(2.209±0.027)明显高于Dox(-)组(1.000±0.017),差异有统计学意义,t=66.576,P<0.001.蛋白质印迹实验验证了在敲低MAMSTR表达的HepG2细胞中,PUMA蛋白在Dox(+)组(1.390±0.018)中相对于Dox(-)组(0.988±0.030)表达上调,差异有统计学意义,t=16.270,P=0.004;BCL2蛋白在Dox(+)组(0.565±0.005)相比Dox(-)组(1.046±0.038)表达下调,差异有统计学意义,t=17.635,P=0.003.定量PCR实验显示,BAX基因在Dox(+)组中相对表达量(1.415±0.055)明显高于Dox(-)组(1.000±0.020),差异有统计学意义,t=9.969,P=0.010.转录因子分析表明,MAMSTR可能通过E2F1参与调控细胞生长,相关E2F1蛋白转录结合域包括cisbp_M3134、transfac_pro_M00920和transfac_public_M00516等.进一步分析发现,E2F1与MAMSTR表达呈正相关,r=0.566,P<0.001.结论 MAMSTR基因是促进HCC进展和导致HCC患者预后不良的可能因素之一,其可能通过调节E2F1转录因子网络进而调控HCC细胞增殖和凋亡.
含有SAP结构域的肌肉增强因子2激活基因、肝细胞癌、E2识别位点协同结合DNA的转录激活因子1、细胞增殖、细胞凋亡
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R735.7(肿瘤学)
国家自然科学基金;江苏省基础研究计划;江苏省高等学校基础科学
2023-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
1091-1099
