10.16073/j.cnki.cjcpt.2023.12.02
lncRNA HOTAIR靶向调控血管舒张剂激活磷蛋白对宫颈癌细胞迁移与侵袭的影响
目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)和血管舒张剂激活磷蛋白(VASP)在宫颈癌细胞迁移和侵袭过程中的分子调控机制.方法 敲降HOTAIR实验中,siHOTAIR-Ⅰ和siHOTAIR-Ⅱ作为HO-TAIR敲降组.敲降VASP实验中,siVASP作为VASP敲降组.2组实验均以siNC作为对照.过表达VASP实验中,通过脂质体转染pCDNA3.1-VASP使VASP在HeLa细胞中高表达,以空载pCDNA3.1作为对照.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测敲降HOTAIR后HOTAIR表达变化情况.蛋白质印迹法检测敲降HOTAIR后VASP蛋白表达水平的变化,划痕实验和Transwell实验用于检测敲降HOTAIR或过表达/敲降VASP对HeLa细胞迁移和侵袭的影响.生物信息学分析用于分析VASP与miR-206之间的调控关系.过表达miR-206实验中,转染miR-206 mimics用于HeLa细胞中过表达miR-206,NC(mimics)作为对照组.敲降miR-206实验中,转染miR-206 inhibitor用于抑制miR-206表达,NC(inhibitor)作为对照组.蛋白质印迹法检测过表达或抑制miR-206对VASP蛋白水平的影响.将miR-206 mim-ics与VASP-UTR进行共转染,通过双荧光素酶报告系统检测miR-206对VASP的调控作用,共转染miR-206 mimics与VASP-UTR-wt作为对照.划痕实验和Trans well实验用于检测NC(mimics)、miR-206 mimics以及共转染miR-206 mimics与siVASP 3种分组对HeLa细胞迁移和侵袭的影响.采用独立样本t 检验、单因素方差分析以及Dunnett-t等方法对实验数据进行统计学分析.结果 通过siRNA沉默HOTAIR表达,与siNC组(1.00±0.02)相比,siHOTAIR-Ⅰ和siHOTAIR-Ⅱ组中HOTAIR相对表达量分别为0.36±0.05和0.42±0.02,差异有统计学意义,F=387.724,P＜0.001.蛋白质印迹法结果显示,抑制HOTAIR可下调VASP蛋白表达,F=93.722,P＜0.001.划痕实验结果显示,siNC组及敲降HOTAIR实验组划痕的相对宽度分别为0.18±0.02、0.41±0.02和0.39±0.03,差异有统计学意义,F=85.941,P＜0.001.Transwell实验结果显示,siNC组及敲降HOTAIR实验组中侵袭转移的细胞相对数目分别为1.00±0.07、0.34±0.03和0.28±0.09,差异有统计学意义,F=116.153,P＜0.001.生物信息学分析结果表明,VASP可能是miR-206的靶基因.同时,转染miR-206 mimics后,相比于NC(mimics)的0.99±0.05,VASP相对表达量为0.73±0.04,差异有统计学意义,F=35.788,P=0.004.转染 miR-206 inhibitor 后,VASP 的相对表达量为 1.65±0.07,相比于NC(inhibitor)中VASP的相对表达量0.96±0.03,差异有统计学意义,F=227.705,P＜0.001.双荧光素酶报告基因检测结果显示,共转染miR-206 mimics和VASP UTR-mut荧光素酶活性(6.44±0.42)高于共转染miR-206 mimics和VASP UTR-wt(1.00±0.18),差异有统计学意义,F=425.195,P＜0.001.同时,划痕实验结果显示,转染miR-206 mimics 在 24 和 48 h 划痕的相对宽度分别为 0.62±0.03 和 0.37±0.02,相比于 NC(mimics)的 0.44±0.02 和0.28±0.02,差异有统计学意义(F24h=74.769,P24h＜0.001;F48h=30.375,P48h=0.005).Transwell 实验结果显示,转染miR-206 mimics后侵袭转移的细胞相对数目为0.38±0.06,相比于NC(mimics)的1.00±0.04,差异有统计学意义,F=221.769,P＜0.001.而且,沉默HOTAIR表达后,miR-206相对RNA表达水平分别为17.32±3.12和18.52±4.24,高于siNC组(1.00±0.03),差异有统计学意义,F=31.549,P＜0.001.结论 HOTAIR调控宫颈癌细胞的迁移和侵袭可能是通过miR-206调控VASP表达来实现的.
长链非编码RNA、血管舒张剂激活磷蛋白、宫颈癌细胞、miR-206、迁移、侵袭
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R737.33(肿瘤学)
湖北省省级大学生创新创业训练计划项目S202110488058
2023-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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