胃肠道间质瘤细胞系建立及其对C-KIT下游抑制剂敏感性研究
目的 随着胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)诊出率不断升高,靶向抑制剂相关研究亟待开展,但国内可利用的GIST模型十分有限.本研究旨在建立人GIST细胞模型,探讨靶向抑制剂作用.方法 利用手术切除的人GIST腹膜转移灶组织1例进行体外原代培养,连续传代培养＞20代进行鉴定,绘制增殖周期生长曲线.免疫细胞化学检测CD117和DOG1表达,进行染色体核型分析,PCR法检测C-KIT基因与PDGFRA基因突变,CCK8法观察C-KIT 2种通路抑制剂效果,皮下接种BABL/c nu裸鼠检测致瘤性,PCR法进行种属鉴定及支原体检测,短串联重复序列(short tandem repeats,STR)检测鉴定细胞身份.结果 可在体外连续传代的人胃肠道间质瘤细胞命名为PUMC GIST 1,连续传代后细胞可见分枝,呈神经细胞样生长,传代后于第5天到达平台期;CD117和DOG-1表达均阳性;不同代数细胞染色体核型有变化,在38～48条;细胞C-KIT基因11号外显子5'端突变热点区有突变V559D,PDG-FRA基因12号外显子CCG-CCA突变.单独用药结果显示,不同浓度GDC-0941处理48 h后,PUMC-GIST-1(F=8.96,P＜0.001)和GIST-430细胞(F=3.19,P=0.03)增殖能力均下降,差异有统计学意义;不同浓度AZD-6244处理48 h后,PUMC-GIST-1细胞增殖能力整体呈现上升趋势,差异有统计学意义,F=9.78,P＜0.001;GIST-430细胞增殖能力整体呈现下降趋势,差异有统计学意义,F=6.61,P＜0.001.联合用药结果显示,PUMC-GIST-1增殖能力减弱,阴性对照组和5 μmol/L AZD+5 μmol/L GDC组吸光度(A)值分别为0.41±0.01和0.37±0.03,差异有统计学意义,F=3.30,P=0.007;GIST 430增殖能力减弱,阴性对照组和5μmol/L AZD+5 μmol/L GDC组吸光度(A)值分别为2.12±0.11和0.13±0.01,差异有统计学意义,F=158.61,P＜0.001.PUMC-GIST-1较GIST-430对联合用药低敏感.当AZD与GDC浓度分别为5μmol/L时二者具有协同抑制作用,金正均Q值检验PUMC-GIST-1与GIST-430的q值分别为3.08与3.91,均＞1.15.裸鼠体内接种不成瘤;PUMC-GIST-1种属鉴定为人源性,STR结果与原代一致,无支原体污染.结论 建立了C-KIT突变的PUMC-GIST-1细胞系,该细胞系对C-KIT靶向药低敏感,为胃肠肿瘤研究提供了新型细胞系.
胃肠道间质瘤、C-KIT、药物低敏感、细胞系、PDGFRA
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R735(肿瘤学)
中国医学科学院医学与健康科技创新工程2016-12M-3-005;国家科技资源共享平台NST1-CR18
2019-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
764-770,777
