靶向HOXA9基因shRNA慢病毒载体对U937细胞增殖与凋亡影响观察

摘要：

目的:观察慢病毒介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9 (homeobox A9,HOXA9)基因对U937细胞增殖和凋亡的影响.方法:前期从4条针对HOXA9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出了1条敲减效率最高的包装成慢病毒HOXA9/GV118RNAi-LV#2.实验分为对照组(control,CON)、阴性对照组(negative control,NC)及敲减组(knock down,KD).HOXA9/GV118RNAi-LV#2感染U937细胞5d后,FCM检测U937细胞感染效率,应用实时荧光定量PCR法检测HOXA9 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测HOXA9蛋白的表达;MTT法和绘制细胞生长曲线检测细胞增殖抑制情况;FCM检测细胞凋亡及细胞周期;RT-PCR法检测细胞c-mycmRNA及p27 mRNA表达情况.结果:慢病毒感染效率＞90％,KD组细胞中HOXA9 mRNA的沉默效率＞55％,HOXA9蛋白的表达量明显减少,其中KD组相对表达水平达(0.223±0.024),显著低于NC组(0.884±0.009)及CON组(0.891±0.013),差异有统计学意义,F=1 566.202,P＜0.001.MTT结果显示,KD组细胞的IR值为(40.469±1.756)％,明显高于NC组及CON组(F=1 311.928,P＜0.001),细胞生长曲线表明该组细胞生长速度减慢;FCM结果显示,KD组、NC组及CON组凋亡率分别为(26.762±2.245)％、(6.819±0.547)％和(6.113±0.349)％,KD组与NC组(q=25.501,P＜0.001)及CON组(q=26.418,P＜0.001)比较差异均有统计学意义,提示该载体显著增加细胞凋亡率;其细胞周期G0/G1期细胞比例较CON组及NC组明显增加,提示该载体使细胞周期阻滞于G0/G1期,F=27.769,P-0.001;RT PCR结果表明,U937细胞KD组较CON组及NC组c-mycmRNA表达水平下降,p27 mR-NA表达水平上升.结论:靶向HOXA9基因shRNA慢病毒载体能稳定沉默HOXA9表达,可显著抑制U937细胞增殖并促进其凋亡,同时可下调c-myc表达,上调p27表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期.

关键词：HOXA9、白血病、慢病毒、RNA干扰、U937、细胞凋亡

所属期刊栏目：21

分类号：R733.7(肿瘤学)

资助基金：山东省科学技术发展计划2010GSF10264;山东省自然科学基金Y2007C018

在线出版日期：2014-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：187-192