慢病毒介导的干扰及过表达HSP90β对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭的影响

摘要：

目的 通过慢病毒介导的干扰及过表达探讨HSP90β对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭的影响.方法 使用慢病毒构建干扰、过表达HSP90β的质粒,通过琼脂糖电泳、测序法鉴定.构建慢病毒质粒转染H1299细胞.使用嘌呤霉素对MG-63转染细胞进行筛选,计算转染效率.实验分干扰对照组(negative control-shRNA)、HSP90β干扰组(HSP90β-shRNA)、过表达对照组(negative control-pEZ)及HSP90β过表达组(HSP90β-pEZ).以实时荧光定量PCR、Western-blot法检测mRNA和蛋白表达水平.用Transwell小室法检测MG-63侵袭能力.结果 插入片段与目的 基因序列一致.嘌呤霉素MG-63细胞株最小致死浓度为3μg/mL,感染复数(multiplicity of in-fection,MOI)为200,感染效率为80％.HSP90β干扰效率为81.15％,过表达组HSP90β mRNA及蛋白相对表达增加(P＜0.01).干扰组HSP90β mRNA及蛋白的相对表达量下降(P＜0.01).与亲本细胞相比,shRNA-HSP90β组MG-63细胞的侵袭能力下降(P＜0.01),而pEZ-HSP90β组MG-63细胞侵袭能力增强(P＜0.05).shRNA-HSP90β组的MMP2、Snail表达减少,E-cadherin表达增加,而pEZ-HSP90β组的MMP2、Snail表达增加,E-cadherin表达减少.结论 干扰及过表达HSP90β的人骨肉瘤细胞系MG-63构建成功,并稳定表达;HSP90β可通过抑制E-cadherin表达增加MMP2、Snail表达,增强骨肉瘤细胞MG-63的侵袭性.

关键词：MG-63;HSP90β;RNA干扰;过表达;侵袭

所属期刊栏目：42

分类号：R738.1(肿瘤学)

资助基金：北京积水潭医院院级科研基金ZR-201906

在线出版日期：2021-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：151-158