低氧下K562细胞红系分化模型的构建

摘要：

目的 通过筛选更优条件,构建不同低氧(1％和3％O2)下K562细胞红系分化模型,为后期miRNA的检测奠定基础.方法 将K562细胞分别置于常氧、低氧(1％和3％O2)条件下经不同浓度(30和40μM)氯化血红素(hemin)诱导0、48、72、96 h,以不同培养时间下的细胞浓度增长速率判断指数生长期;用联苯胺染色法选择合适的hemin浓度;结合联苯胺染色阳性细胞率、γ-globin的mRNA水平的变化以及CD235a的表达水平的变化判断细胞分化效率;MTS细胞增殖实验检测细胞增殖的情况与流式细胞周期检测结果分析细胞增殖水平的变化;用流式检测细胞凋亡率判断氧浓度对凋亡的影响.结果 (1)不同培养时间的计数结果显示48～72 h间细胞增殖速率最快.(2)联苯胺染色结果提示以40μM的hemin诱导细胞获得的阳性率更高.(3)联苯胺染色结果显示,1％O2条件下72、96 h即刻细胞的阳性率明显高于常氧(P＜0.05);而3％O2条件下常氧低氧各时间点间无明显差异;γ-globin的检测结果显示,1％O2条件下96 h的表达水平是常氧的2.5倍(P＜0.05),而同样时间、3％条件下仅为常氧的1.4倍(P＜0.05);流式检测CD235a结果显示,1％O2条件下,CD235a阳性细胞率表现为48～72 h下降,72～96 h上升的变化趋势,且96 h常氧低氧差异明显(P＜0.05);3％O2条件下则表现为随时间延长逐步下降的趋势,96 h常氧低氧差异有统计学意义(P＜0.05).(4)结合MTS及细胞周期检测结果发现,不同氧浓度下细胞的增殖水平与常氧组无明显差异(P＞0.05).(5)流式检测细胞凋亡情况显示,1％O2条件下72、96 h即刻凋亡率略高于常氧,但差异无统计学意义(P＞0.05);3％O2条件下常氧低氧各时间点凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本实验确立的实验参数,构建了符合试验要求的较为理想的K562红系分化模型(低氧下),为后期miRNA的检测奠定了基础.

关键词：高原、低氧、红系分化、模型、构建

所属期刊栏目：39

分类号：R74(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81760333;青海省科技厅应用基础研究计划项目2017-ZJ-722;青海省中藏药研究课题项目2016205

在线出版日期：2019-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：217-225