从江香猪FGF10基因干扰载体的构建及相关基因表达分析

摘要：

成纤维细胞生长因子10基因(fibroblast growth factor 10,FGF10)属于成纤维细胞生长因子家族成员之一,在脂肪组织的发育和代谢过程中具有重要的作用.为了进一步揭示FGF10基因在从江香猪(Sus scrofa)肌内脂肪中的调控作用,本研究通过在线软件设计了FGF10基因4对siRNA干扰序列和一对阴性对照序列,连入pGPU6/GFP/Neo载体后,筛选成功构建的干扰载体,并转染从江香猪肌内前体脂肪细胞,并采用qRT-PCR的方法筛选出最佳干扰载体,通过最佳干扰载体抑制FGF10基因的表达,采用qRT-PCR检测沉默FGF10对脂肪分化关键基因—过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因(peroxisomeproliferator activated receptorγ,PPARγ)、脂肪组织甘油三酯水解酶基因(adipose triglyceride lipase,ATGL)、脂联素基因(adiponectin,ADIPOQ)、脂肪酸结合蛋白4基因(fatty acid binding protein 4,FABP4)、脂肪酸合成酶基因(fatty acid synthase,FAS)、脂蛋白酯酶基因(lipoprotein lipase,LPL)、乙酰辅酶A羧化酶基因(acetyl-CoA carboxylase,ACC)以及激素敏感脂酶基因(hormone sensitive lipase,HSL)表达的影响.结果表明,本实验成功构建了从江香猪FGF10基因的干扰载体,并筛选出最佳干扰载体的干扰效率达74.30％;抑制FGF10基因表达后,相关脂肪分化关键基因ACC、ATGL、ADIPOQ、FABP4、FAS、LPL、PPARγ和HSL的表达量均显著降低,ACC与PPARγ的表达量显著低于空白对照组(P＜0.05),ATGL、ADIPOQ、FABP4、FAS和LPL这5个基因的相对表达量均是极显著低于空白对照组(P＜0.01),HSL基因的相对表达量与对照组无显著性差异(P＞0.05).本实验将构建的FGF10基因的干扰载体成功地转染了从江香猪肌内前体脂肪细胞,体外沉默FGF10基因可抑制猪肌内前体脂肪的分化,这可能与相关脂肪分化基因的低表达有关.本研究为进一步研究FGF10基因对脂肪沉积的调控机理奠定基础.

关键词：从江香猪、FGF10基因、干扰载体、肌内前体脂肪细胞、基因表达

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分类号：S828(家畜)

资助基金：国家科技支撑计划2015BAD03B02-3;黔科合重大专项黔科合NY字[2013]6008号

在线出版日期：2018-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2066-2074