高糖条件下沉默LRP6通过Wnt/β-catenin途径抑制大鼠视网膜Müller细胞的自噬与凋亡

摘要：

目的:探究在高糖作用下大鼠视网膜Müller细胞中低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)的表达及其对高糖条件诱导的Müller细胞自噬与凋亡的作用和机制.方法:体外培养大鼠视网膜Müller细胞,采用RT-PCR与Western blotting检测高糖条件下Müller细胞中LRP6 mRNA和蛋白的表达水平;利用siRNA干扰技术沉默Müller细胞中的LRP6,并分别在葡萄糖浓度为5.6 mmol·L-1(NG)与35 mmol·L-1的DMEM培养液(HG)中进行培养,按处理方式的不同将Müller细胞分为葡萄糖浓度为5.6 mmol·L-1的DMEM培养的正常葡萄糖组(NG组)、葡萄糖浓度为35 mmol·L-1的DMEM培养的转染si-NC组(HG+si-NC组)和si-LRP6的Müller细胞组(HG+si-LRP6组);采用Western blotting检测各组Müller细胞中自噬相关蛋白P62的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ之值、Beclin1与Atg12-Atg5复合体的表达;共聚焦显微镜观察RFP-GFP-LC3串联质粒转染后各组Müller细胞中自噬通量的变化;TUNEL染色检测各组Müller细胞的凋亡率,Western blotting法检测细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax与cleaved Caspase-3及Wnt/β-catenin途径中β-catenin蛋白的表达.结果:与NG组相比,HG组Müller细胞中LRP6 mRNA和蛋白的表达水平明显增高(P<0.01);与NG组比较,HG+si-NC组、HG+si-LRP6组Müller细胞中除P62和Bcl-2蛋白表达显著降低外(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ之值、Beclin1与Atg12-Atg5复合体、细胞中自噬通量、TUNEL阳性细胞率及细胞中Bad、cleaved Caspase-3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);而与HG+si-NC组比较,HG+si-LRP6组中除P62、Bcl-2蛋白明显升高外(P<0.05),其他检测指标均显著降低;此外,与NG组比较,HG+si-NC组中β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.05),而HG+si-LRP6组明显降低(P<0.05);其中与HG+si-NC组相比,HG+si-LRP6组中β-catenin蛋白的降低趋势更为显著(P<0.01).结论:高糖可促进Müller细胞中LRP6的表达,采用siRNA干扰技术沉默细胞中LRP6表达可能通过下调Wnt/β-catenin途径抑制高糖诱导的Müller细胞自噬,并减少细胞的凋亡.

关键词：高糖、低密度脂蛋白受体相关蛋白6、视网膜Müller细胞、自噬、凋亡、大鼠

所属期刊栏目：42

分类号：R774.1(眼科学)

资助基金：广东省医学科研基金资助项目B2021203

在线出版日期：2023-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：32-40