链霉菌来源谷氨酰胺合成酶GLnA_Shy的性质表征

摘要：

在大肠杆菌BL21(DE3)中对吸水链霉菌5008的GLny_Shy基因进行克隆表达.GLnA_Shy蛋白由469个氨基酸组成,其分子量约为5.2×104.体外酶学性质及酶动力学测定结果显示,GLnA_Shy酶催化反应的最适温度为35℃,最适pH为7.5,对底物谷氨酸的米氏常数(Km)和催化常数(kcat)分别为(21.8±3.2)μmol/L和(3.8±0.5)×10-3 s-1.进化树分析和同源建模结果显示GLnA_Shy蛋白属于谷氨酰胺合成酶(GS)家族,该酶包含一个较小的N端结构域(残基区域为16～94)和一个较大的C端结构域(残基区域为101～466),其三级结构具有GS典型的双通道结构,与底物谷氨酸的结合位点为Glu131、Ser264、Arg320和Arg359.谷氨酰胺合成酶在含氮化合物的生产上应用广泛,通过解析GLnA_Shy的功能,为进一步对其进行定点改造提供了理论基础.

关键词：谷氨酰胺合成酶、大肠杆菌、同源建模、链霉菌、克隆表达

所属期刊栏目：42

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金31770098,31620103901

在线出版日期：2020-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：249-256