一步法分离石蜡切片DNA的改进与鉴定

摘要：

目的：改进一种以含蛋白酶K的裂解液作用于石蜡包埋处理的细胞、分离DNA粗提液用于PCR扩增的实验方案。方法石蜡包埋组织切片经常规脱蜡处理,用蛋白酶K裂解液洗脱细胞,55℃消化3 h后离心,吸取上清液；分光光度法检测DNA酶裂解液质量和浓度；以之为模板分别扩增人线粒体基因微卫星多态D310区、ATPase6基因区和核基因HBB、BRCA1等的DNA片段,琼脂糖凝胶电泳检测分析PCR扩增情况,并测序验证扩增产物。结果以石蜡切片的DNA裂解粗提液为模板,扩增目的DNA片段阳性率可达100%；获得序列分析验证。结论改进的蛋白酶K裂解液一步洗脱消化法操作简单、过程快捷、费用低廉,能快速有效地分离石蜡组织切片DNA,用于后续PCR扩增检测,具有较高效率。

关键词：DNA分离、石蜡包埋组织切片、线粒体DNA、核基因

分类号：R446(诊断学)

资助基金：湖南省科技计划2010FJ3084;中南大学学位与研究生教育教学改革研究2340-74333003019;中南大学教师科研基金2013JSJJ042

在线出版日期：2015-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：698-702