IDO启动序列GAS和ISRE荧光素酶报告基因载体构建及其活性检测

摘要：

目的构建pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS两个荧光素酶报告基因载体,并对其进行生物活性鉴定。方法通过人工合成调控吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的启动序列ISRE4(4个串联的ISRE序列)和GAS7(7个串联的GAS序列),与pGL3-Enhancer连接成重组体pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7,通过转化扩增,筛选出阳性克隆,并通过酶切、测序及生物学活性检测鉴定构建好的荧光素酶报告基因载体。结果成功地构建了pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7两个荧光素酶报告基因载体,在IFN-γ的诱导下,能启动细胞内荧光素酶的表达。结论 pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7的荧光素酶报告基因载体的成功构建为研究IDO蛋白的表达调控机制和以IDO为靶标的抗肿瘤免疫耐受药物快速高通量的筛选提供了重要的研究工具。

关键词：吲哚胺2、3-双加氧酶、启动子序列、荧光素酶报告基因、γ-干扰素、肿瘤免疫耐受

分类号：R730.51(肿瘤学)

资助基金：湖南省自然科学基金资助项目13JJ4078

在线出版日期：2014-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：120-124