Cofilin-1慢病毒载体的构建及其在Huh-7中的过表达

摘要：

目的 构建Cofilin-1过表达的Huh-7细胞株. 方法 应用RT-PCR克隆出Cofilin-1的完整编码序列,将其亚克隆到慢病毒载体pWPT中,构建慢病毒载体表达质粒pWPT-Cofilin-1；将慢病毒表达质粒pWPT-Cofilin-1或pWPT-GFP与慢病毒包装质粒pMD2.G、psPAX2共转染293T细胞,获得携带Cofilin-1完整编码序列的慢病毒和携带GFP基因的慢病毒,将两种慢病毒分别感染Huh-7细胞；通过Real-Time PCR和Western blot检测Huh-7细胞中的Cofilin-1的过表达情况. 结果 测序结果显示成功构建重组慢病毒表达质粒pWPT-Cofilin-1；慢病毒有效感染Huh-7细胞,依据GFP绿色荧光可测定感染有效率超过95％；Cofilin-1在Huh-7细胞中的mRNA量和蛋白水平都成功的过表达. 结论 本实验的完成,为进一步研究Cofilin-1基因在肝癌中的生物功能和作用机制奠定了基础.

关键词：Cofilin-1、慢病毒载体、Huh-7细胞

所属期刊栏目：40

分类号：R730.53;R734.2(肿瘤学)

在线出版日期：2012-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：65-69