沙眼衣原体pORF5蛋白真核表达系统的构建与鉴定

摘要：

目的 构建沙眼衣原体(Ct)pORF5基因重组质粒pDSRed-C1/pORF5,建立pORF5稳定转染的表达系统并对其进行鉴定. 方法 PCR法扩增pORF5基因,定向插入pDSRed-C1真核表达载体构建pDSRed-C1/pORF5重组体,重组体经酶切、PCR及测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染法,分别将pDSRed-C1/pORF5和pDSRed-C1导入HeLa-229细胞,通过G418筛选获得转入目的 基因的阳性细胞克隆;荧光显微镜和Western blot检测pORF5蛋白在细胞中的表达. 结果所克隆的pORF5基因片段经测序完全正确;转染pDSRed-C1/pORF5的HeLa-229细胞大部分有pORF5蛋白的表达,而转染空载体pDSRed-C1或未转染的HeLa-229细胞,均未见pORF5蛋白表达. 结论 成功构建了稳定表达外源新基因pORF5的细胞系,为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制、研制基因工程疫苗提供了有利的条件.

关键词：沙眼衣原体、pORF5基因、真核表达

所属期刊栏目：38

分类号：R374.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30970165;湖南省自然科学基金09JJ3059

在线出版日期：2010-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：17-20