pEGFP-C1-miR-335重组质粒的构建及其在乳腺癌细胞中的表达

摘要：

目的 构建携带融合型microRNA(微小RNA)基因miR-335的荧光真核表达质粒pEGFP-C1-miR-335,并观察其在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达.为研究小RNA基因表达调控机制建立实验基础. 方法 应用基因重组技术,从人类基因组DNA中扩增miR-335的前体序列,经PCR引物加入酶切位点, 酶切后插入荧光真核表达载体pEGFP-C1, 构建miR9真核表达载体pEGFP-C1-miR-335, 然后进行酶切和测序鉴定重组质粒的正确性.应用脂质体介导的转染技术将该质粒导入MDA-MB-231细胞,24 h后观察荧光蛋白表达情况,用Northern blot方法检测miR-335表达. 结果 酶切和测序鉴定证实插入miR-335前体片段序列正确.细胞转染24 h后,荧光显微镜下观察到GFP表达,60%左右转染细胞发出荧光.Northern blot检测到miR-335表达. 结论 成功构建pEGFP-C1-miR-335荧光真核表达载体,并可在乳腺癌细胞中有效表达.

关键词：miR-335、pEGFP-C1、微小RNA、乳腺癌细胞

所属期刊栏目：37

分类号：R737.9(肿瘤学)

在线出版日期：2009-12-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：525-527