乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建及表达

摘要：

目的 构建含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X基因的真核表达载体,为探讨HBV X基因与慢性乙型肝炎及肝癌发生的关系提供实验依据.方法 用PCR方法 扩增含EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的X基因序列,对pcDNA3.1(+)载体及X基因PCR产物双酶切,用连接酶将两者连接并转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定,构建HBV X基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx.用梭华-SofastTM基因转染试剂将其质粒转染THP-1巨噬细胞,细胞裂解液经SDS-PAGE及转硝酸纤维素膜后做Western blotting,鉴定目的蛋白.结果 双酶切pcDNA3.1(+)-HBx后,琼脂糖电泳可分别见到大小约为5.4 kb和465 bp片断,说明X亚克隆入pcDNA3.1(+),经序列测定其含有完整的X基因片段; Western blotting结果显示pcDNA3.1(+)-HBx能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx,并能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白.

关键词：乙肝病毒(HBV)、X基因、X蛋白、真核表达

所属期刊栏目：34

分类号：R373.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：湖南省卫生厅科研项目B2005084

在线出版日期：2006-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：320-323