成纤维活化蛋白在眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞中的表达研究

摘要：

目的:通过培养、分离、纯化、鉴定眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞(CAFs)及正常眼睑皮肤成纤维细胞(NFs),将两种成纤维细胞的生物学特性和成纤维活化蛋白(FAP)表达情况进行对比研究,以进一步探究FAP以及CAFs在眼睑基底细胞癌发病及其发展中的作用及意义.方法:将眼睑基底细胞癌及眼睑正常皮肤组织块贴壁培养获得原代CAFs及NFs,于倒置相差显微镜下观察纯化的两种细胞第3代的细胞形态并用细胞免疫化学染色(SP法)鉴定两种细胞;MTT法检测细胞生长增殖活力;通过RT-qPCR、Western Blot分别检测其FAP mRNA、蛋白在两种细胞中的表达差异.结果:眼睑CAFs呈长梭形或纺锤形,胞质突明显减少,而胞浆内具有较多颗粒,细胞体积差异明显,排列紊乱且密集,丧失接触抑制,存在明显的重叠生长现象;NFs呈长梭形,但胞浆内颗粒少见,细胞体积较均一,放射状排列,存在接触抑制,未见重叠生长.眼睑CAFs的增殖速度明显快于NFs.RT-qPCR法检测眼睑CAFs中FAP mRNA相对于内参的表达量为3.672±0.221,明显高于眼睑NFs中的含量1.034±0.024(P<0.05).Western Blot法检测两种细胞中FAP蛋白表达水平发现,FAP在眼睑CAFs中高表达,而眼睑NFs中几乎不表达(P<0.05).结论:眼睑CAFs与眼睑NFs在形态结构、生长增殖、生长因子表达等生物学特征方面发生了显著改变,提示肿瘤微环境随眼睑基底细胞癌的发生发展相应地发生了一些变化,进而诱导NFs生物学特性和功能发生改变,最终转变为CAFs.此外,眼睑CAFs较NFs高表达分泌FAP,表明肿瘤细胞微环境中FAP可能参与肿瘤的发生发展,与眼睑基底细胞癌浸润性生长有一定关系.

关键词：成纤维活化蛋白;眼睑基底细胞癌;癌相关成纤维细胞;正常成纤维细胞

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在线出版日期：2021-08-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1345-1350