内质网应激在氧化低密度脂蛋白诱导的人RPE细胞凋亡中的作用

摘要：

目的:观察内质网应激(ERS)在氧化低密度脂蛋白(OxLDL)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡中的作用.方法:人RPE细胞系ARPE19采用低糖DMEM培养基和10％胎牛血清进行常规培养.实验分为3组:对照组(常规培养的ARPE19)、OxLDL组(加入5、10、25、50、100μg/mL OxLDL)和LDL组(加入5、10、25、50、100μg/mL LDL)培养24h.分别采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测各组细胞活性,流式细胞仪检测凋亡比例,蛋白质印迹(Western blotting)检测ERS相关蛋白及凋亡相关酶的表达.激光共聚焦显微镜观察人RPE细胞吞噬红色荧光探针Dil标记的氧化低密度脂蛋白(Dil-OxLDL)情况.结果:CCK8结果显示:对照组细胞存活率为(100±5.637)％,加入5、10、25、50、100μg/mL OxLDL后细胞活力分别为(105.298±9.395)％、(97.106±5.417)％、(77.015±4.055)％、(67.613±3.853)％和(43.872±9.532)％(P<0.05);加入5、10、25、50、100μg/mL LDL后细胞活力分别为(97.55±6.217)％、(99.640±3.586)％、(90.495±2.786)％、(83.552±9.171)％和(90.910±1.429)％(P>0.05).流式细胞仪结果显示浓度为25μg/mL的OxLDL会明显诱导细胞凋亡,对照组、OxLDL组(25μg/mL)和LDL(25μg/mL)组凋亡率分别是(5.271±0.519)％、(41.23±1.686)％和(13.07±2.579)％(P<0.01);Western blotting结果显示OxLDL(25μg/mL)组的ERS相关蛋白和凋亡相关酶的表达量明显高于对照组与LDL组(Caspase-12:F=50.53,P<0.05;GRP78:F=55.60,P<0.05;CHOP:F=38.22,P<0.05;XBP-1:F=53.94,P<0.05;ATF6:F=20.01,P<0.05),而LDL组(25μg/mL)和对照组之间无差异(P>0.05).结论:ERS参与了OxLDL诱导的人RPE细胞凋亡,调控ERS可能抑制人RPE细胞凋亡,从而治疗RPE细胞凋亡相关疾病.

关键词：年龄相关性黄斑变性、视网膜色素上皮、氧化应激、内质网应激、凋亡

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资助基金：国家自然科学基金资助项目;陕西省自然科学基金资助项目

在线出版日期：2020-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1688-1692