糖尿病大鼠玻璃体腔注射缺氧诱导因子-1α siRNA对血管内皮生长因子蛋白表达的影响

摘要：

目的：观察缺氧诱导因子-1α( hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)小干扰RNA( siRNA)对糖尿病大鼠视网膜组织中血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达的抑制作用,及其用于糖尿病新生血管性疾病治疗的可行性。<br>　　方法：以pSilencer2.1-U6 neo为质粒载体,构建HIF-1α. siRNA重组质粒。选取雄性Sprague-Dawley( SD)大鼠54只,随机分为正常对照组(15只)和实验组(39只)。实验组采用尾静脉注射链尿佐菌素( STZ)的方法建立糖尿病大鼠模型,造模成功后将实验组随机分为糖尿病组(15只)、基因治疗组(12只)和空载体组(12只)。正常对照组及糖尿病组大鼠均不做转染；基因治疗组和空载体组分别转染HIF-1α. siRNA 重组质粒和pSilencer空载体质粒。行苏木精-伊红染色( hematoxylin-eosin staining,HE染色)观察视网膜组织形态,并采用免疫组织化学法检测VEGF蛋白的表达。分别于干扰后24、48、72h,1wk时计算VEGF蛋白的抑制效率。采用单因素方差分析和LSD-t检验进行统计学分析。<br>　　结果：HIF-1α. siRNA 重组质粒经酶切、测序鉴定,确定为目的序列。 HE染色显示：正常对照组大鼠视网膜各层细胞排列整齐,细胞形态基本正常。糖尿病大鼠视网膜各层细胞排列紊乱,内界膜不完整,新生血管芽、新生血管簇呈垂直状突破内界膜生长。免疫组织化学染色显示：VEGF阳性表达为细胞浆出现棕黄色颗粒,主要位于神经节细胞层。正常对照组VEGF蛋白呈弱阳性表达,而DR对照组和空载体组表达明显增强,基因治疗组较DR组和空载体组表达明显减少,差异有统计学意义( P<0.05)。 VEGF蛋白抑制率24、48、72 h和1 wk时分别为：27.4%、40.6%、47.5%、64.5%。<br>　　结论：HIF-1α. siRNA重组质粒能够抑制糖尿病大鼠视网膜中VEGF蛋白的表达,可能成为一种治疗糖尿病性新生血管疾病的新方法。

关键词：缺氧诱导因子-1、血管内皮生长因子、RNA 干扰、视网膜新生血管、基因治疗

分类号：R73;R25

资助基金：天津市科技支撑重点项目08ZCGYSF01700

在线出版日期：2015-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1700-1704