siRNA特异性沉默HIF-1α对缺氧培养的OCM-1细胞中Vimentin表达的影响

摘要：

目的：研究小干扰RNA （ siRNA ）特异性沉默缺氧诱导因子-1α（ HIF-1α）对缺氧状态下人眼葡萄膜黑色瘤OCM-1细胞中波形蛋白（Vimentin）表达的影响，初步探讨HIF-1α对葡萄膜黑色瘤上皮-间质转化（ EMT ）的调控作用。<br>　　方法：体外常氧培养及缺氧培养OCM-1细胞。其中，缺氧培养是通过在培养基中加入浓度为100μmol/L的氯化钴（ CoCl 2）模拟肿瘤内部缺氧微环境，并将缺氧培养细胞分为单纯缺氧组、HIF-1α干扰组、β-actin阳性对照组、无义寡核苷酸阴性对照组及空载脂质体对照组。体外设计合成siRNA（包括HIF-1α-siRNA、β-actin-siRNA及阴性对照），以Lipofectamine TM 2000为载体介导siRNA转染缺氧培养的OCM-1细胞，以RT-PCR和Western blot检测缺氧培养前后及转染前后HIF-1α、Vimentin基因和蛋白的表达。<br>　　结果：单纯缺氧组与常氧组相比，HIF-1αmRNA表达无明显差异（ P＞0．05），蛋白表达显著升高（ P＜0．01），而Vimentin mRNA和蛋白的表达均显著升高（ P＜0．01）。缺氧培养的各组之间相比，阳性对照组β-actin mRNA表达下降（ P＜0．01），证实转染成功；干扰组HIF-1α、Vimentin mRNA和蛋白表达均明显下降（ P＜0．01），阴性对照组、脂质体对照组各检测因素均无明显差别（P＞0．05）。<br>　　结论：缺氧可促使OCM-1细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高，并可通过转录激活下游靶基因 Vimentin，使其在mRNA和蛋白水平表达均升高，提示HIF-1α可能参与调控葡萄膜黑色瘤的EMT ，进而促进肿瘤侵袭、转移；HIF-1α-siRNA转染OCM-1细胞可成功下调HIF-1α及Vimentin的表达，说明从分子水平抑制HIF-1α的表达，可能抑制肿瘤侵袭、转移，从而为肿瘤治疗提供新方向。

关键词：葡萄膜黑色素瘤、缺氧诱导因子-1α、波形蛋白、上皮-间质转化、RNA干扰

分类号：R73;R74

在线出版日期：2014-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：411-415