人眼晶状体醛脱氢酶1的克隆表达和酶特性研究

摘要：

目的:研究人眼ALDH1A1的结构与功能学特点.方法:使用标准的PCR技术,从人晶状体cDNA文库扩增ALDH1A1.扩增的ALDH1A1(1.5kb)被插入到克隆表达载体pET-28b,再转染到菌株BL21DE3中.表达出来的蛋白质经His-tag柱纯化,使用 thrombin切除His-tag.对纯化的ALDH1A1的酶学特点,如酶活性与辅酶、缓冲液、还原剂、pH以及析出方式等的关系进行了检测.结果:从人晶状体的基因文库,成功扩增了ALDH1A1,重组的人晶状体ALDH1A1为1 506bp的DNA及501个氨基酸组成,分子量为54.8kDa,PI=6.8.与人的肝脏ALDH1A1 100%同源,与大鼠和小鼠肝脏的ALDH1A1有85%的同源性.Thrombin酶切较imidazole洗脱的ALDH1A1活性保持得更持久,纯化的ALDH1A1在碱性的sodium pyrophosphate反应缓冲液中,NAD为辅酶和dTT作为还原剂时的活性较高,其活性随pH增高而增加.结论:ALDH1A1与人肝组织的同工酶有相似的作用.

关键词：白内障、脂质过氧化、ALDH、HNE

所属期刊栏目：09

分类号：R77;TP3

在线出版日期：2009-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：676-679