NYD-SP15基因的原核表达及多克隆抗体的制备

摘要：

目的:克隆NYD-SP15基因,构建融合表达载体,在大肠杆菌中表达,并制备抗体.方法:PCR技术扩增NYD-SP15全长开放阅读框,克隆入原核表达载体PET28a,转化大肠杆菌感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,行SDS-PAGE电泳.将此融合蛋白Ni柱纯化后免疫BALB/C小鼠,Western blotting鉴定.结果:成功地构建了PET28a-NYD-SP15原核表达质粒,并获得了高效表达NYD-SP15的BL21菌株,表达的His标签融合蛋白,分子量为58kDa左右,经免疫小鼠获得了抗NYD-SP15抗体.经Western blotting法分析,抗体为NYD-SP15特异性抗体.结论:构建的NYD-SP15基因的原核表达载体,体外高效表达蛋白,免疫小鼠获得抗NYD-SP15抗体,将为眼部增殖性视网膜病变(PVR)的研究及治疗奠定坚实的基础.

关键词：原核表达、NYD-SP15、多克隆抗体

所属期刊栏目：8

分类号：R77(眼科学)

资助基金：国家自然科学基金30000088

在线出版日期：2008-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：483-486