携带 Tum5 基因的慢病毒表达载体的构建及其在人脐静脉血管内皮细胞中的表达
目的 构建及鉴定 Tum5 基因慢病毒表达载体,并观察在体外人血管内皮细胞中的表达.方法 采用PCR技术从含有 tumstatin 基因的质粒克隆模板 pSPORT1-Sfi钓取 Tum5 基因,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU(含 EGFP 基因)中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Tum5,通过酶切、测序验证 Tum5 基因后,将pGC-FU-Tum5质粒和包装质粒pHelper1.0,pHelper2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Tum5 基因和 EGFP 基因的重组慢病毒GC-FU-Tum5,并转染靶细胞人脐静脉血管内皮细胞.通过检测标志蛋白-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和目的蛋白Tum5进一步验证pGC-FU-Tum5在靶细胞中Tum5的表达.结果 (1) pGC-FU-Tum5中携有正确的 Tum5 基因,并能在人类细胞中表达; pGC-FU- Tum5共转染包装细胞293T能产生重组病毒GC-FU-Tum5;(2)目的基因 Tum5 能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞人脐静脉血管内皮细胞,并达到稳定的表达,荧光显微镜下能直接观察到GFP, Western blotting能检测到Tum5蛋白在靶细胞中的表达.结论 成功构建了携带 Tum5 基因的重组慢病毒载体,转染人脐静脉血管内皮细胞后能够稳定表达 Tum5 基因,为进一步研究 Tum5 的功能和眼部新生血管疾病的治疗奠定基础.
Tum5、慢病毒载体、基因转移
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R77(眼科学)
2008-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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