稳定表达MRG15基因的人晶状体上皮细胞株的建立

摘要：

目的:克隆人15号染色体上死亡相关因子(MORF4-re-lated gene on chromosome 15,MRG15)基因的编码区全长,构建真核表达载体,建立稳定表达MRG15的人晶状体上皮细胞株,为MRG15在年龄相关性白内障(age related cataract,ARC)发生中相关功能的研究奠定基础.方法:采用RT-PCR由人ARC晶状体前囊膜标本中扩增MRG15的编码区全长,克隆至pMD18-T载体并测序,结果正确后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,采用脂质体法对培养人晶状体上皮细胞进行稳定转染,挑取单克隆,用Western blot进行MRG15表达的鉴定.结果:测序证实,由ARC晶状体前囊膜中扩增出的MRG15编码区全长序列正确.重组质粒pcDNA3.1(+)-MRG15经酶切后释放出与理论长度相符的片段.培养人晶状体上皮细胞稳定转染挑取单克隆后,经Western blot检测,30个克隆中有19个MRG15的表达量明显增高.结论:克隆了人MRG15的编码区全长,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1 (+)-MRG15,并建立了稳定表达MRG15的人晶状体上皮细胞株.

关键词：MRG15基因、年龄相关性白内障、晶状体上皮细胞、克隆

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分类号：R77(眼科学)

资助基金：国家自然科学基金30000185;第四军医大学校科研和教改项目2004012;第四军医大学校科研和教改项目XJCX05M15

在线出版日期：2006-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：555-557