视网膜下液致视网膜色素上皮细胞和神经胶质细胞增殖过程中PKC活性的变化

摘要：

目的:研究视网膜下液(SRF)能否引起体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)和神经胶质(RG)细胞发生增殖及在其增殖过程中是否出现蛋白激酶C的激活和转位,来探讨RPE和RG细胞增殖与其细胞中PKC信号系统变化的关系以及PKC抑制剂的作用.方法:实验对象为体外培养的RPE和RG细胞;刺激因素为提取PVR分级是B、C级两级患者的SRF和来自角膜移植后的供体眼球所提供的正常玻璃体成分;PKC特异激活剂佛波酯(PMA)为阳性对照;DMEM培养液作为空白对照.用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入法测定各自的RPE和RG细胞增殖情况.用B、C级SRF、正常玻璃体成分、PMA、DMEM培养液分别在不同的时间刺激RPE和RG细胞,通过细胞裂解和离心获取细胞质和细胞膜蛋白粗提液,用同位素32P标记和液体闪烁计数法检测细胞质和细胞膜PKC活性水平.选用PKC抑制剂地喹氯铵预处理各组细胞后,再分别观察各组RPE和RG细胞中PKC活性表达水平及增殖情况.结果:用B、C级SRF和PMA处理过的RPE细胞出现高增殖;SRF和PMA都可以激活RPE和RG细胞质中的PKC,并使其由胞质向胞膜转位,但SRF作用于RPE和RG细胞时,胞膜上PKC活性峰值出现的时间较PMA明显延长.其中,B级SRF作用于RPE和RG细胞时,胞膜上PKC活性峰值出现的时间较C级长且峰值低,增殖程度也低;正常玻璃体成分和DMEM培养液组没有出现PKC活性变化和高增殖.用PKC特异抑制剂预处理各组细胞后,没有出现PKC活性和细胞增殖的改变,组间无显著性差异,P＞0.05.结论:SRF可促进RPE和RG细胞增殖,RPE和RG细胞中的PKC是以激活和转位方式参与细胞增殖的过程;使用PKC特异抑制剂可阻止此过程发生.

关键词：视网膜下液、蛋白激酶C、视网膜色素上皮细胞、神经胶质细胞、激活和转位、增殖

所属期刊栏目：6

分类号：R77(眼科学)

资助基金：国家自然科学基金30471865

在线出版日期：2006-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：513-518