内参法在线粒体DNA纯度鉴定中的应用

摘要：

为了确定普通差速离心法提取的小麦线粒体DNA(mtDNA)的纯度,以小麦肌动蛋白β亚基(β-Actin)、1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基(RabcL)和细胞色素C 氧化酶第三亚基(COXIII)基因的片段作为内参标记,依靠聚合酶链式反应(PCR)及琼脂糖凝胶电泳技术,对提取的mtDNA进行了检测.结果表明,普通差速离心法提取的mtDNA中混杂有核DNA和叶绿体DNA(ctDNA).对提取的mtDNA稀释后再进行内参法检测,结果发现,当mtDNA稀释到DNA原液的300～400倍时,混杂其中的核DNA已达不到PCR反应的敏感度,但mtDNA、ctDNA仍能满足作为PCR反应体系模板的要求.此时,提取到的mtDNA可视为无核DNA污染的细胞质基因组DNA.

关键词：小麦、线粒体DNA、内参法、纯度鉴定

所属期刊栏目：29

分类号：S512.1;S312(禾谷类作物)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划重大专项2009AA101102;陕西省"13115"科技创新工程重大科技专项2007ZDKG-02;国家杨凌农业生物技术育种中心专项99-1A;西北农林科技大学拔尖人才支持计划项目

在线出版日期：2010-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1088-1093