平肝止痫复方联合卡马西平干预HMGB1/TLR4信号炎症通路的相关作用研究

摘要：

目的 研究平肝止痫复方联合卡马西平对难治性癫痫作用及机制.方法 海人酸注射于Wistar大鼠海马CA3区的造模方法制作癫痫模型,予0.03 g/(kg·d)苯妥英钠连续灌胃14 d后结合Racine分级及脑电图筛选成功制作难治性癫痫模型78只.将制作完成的癫痫大鼠随机分为模型组、平肝止痫复方组、CBZ组、CBZ+平肝止痫复方低、中、高剂量组(L、M、H),每组13只,再加假手术组7只,共7组.分组后给予假手术组、模型组灌胃生理盐水,剩余大鼠分别以CBZ0.03 g/(kg·d),平肝止痫复方1.32 g/(kg·d),CBZ+平肝止痫复方低剂量(CBZ+L)、CBZ+平肝止痫复方中剂(CBZ+M)、CBZ+平肝止痫复方高剂量(CBZ+H)组分别给予:0.03+0.66 g/(kg·d),0.03+1.32 g/(kg·d),0.03+2.64 g/(kg·d),灌胃给药8周;观察各组大鼠治疗前后体质量、各致痫组大鼠治疗后发作级别变化、各致痫组大鼠治疗后防卫反应分级变化、各致痫组发作平均持续时间变化,并对各组大鼠治疗后进行脑电图监测;8周药物灌胃结束后股动脉取血,ELISA分别检测各组难治性癫痫大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6的表达;RT-PCR、Western Blot检测大鼠海马HMGB1、TLR4基因和蛋白表达.结果 治疗后大鼠体质量变化:与卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组体质量明显增加,差异具有显著统计学意义(P＜0.01);CBZ+L组体质量增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).各致痫组大鼠治疗后发作级别变化:CBZ+M、CBZ+H组与CBZ组比较,治疗后发作分级等级减少,差异有显著统计学意义(P＜0.01).各致痫组大鼠治疗后防卫反应分级:CBZ+M、CBZ+H组与CBZ组比较,药物灌胃后防卫反应等级减少,差异有显著统计学意义(P＜0.01).各致痫组大鼠治疗后癫痫发作平均持续时间:与卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组平均持续发作时间明显减少,差异有显著统计学意义(P＜0.01);CBZ+L组平均发作持续时间减少,差异有统计学意义(P＜0.05).脑电图结果示CBZ+M、CBZ+H组均可显著抑制海人酸难治性癫痫大鼠的痫性放电;酶联免疫吸附实验(En-zyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测TNF-α表达:与卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H大鼠血清TNF-α含量降低,差异有显著统计学意义(P＜0.01),CBZ+L组大鼠血清TNF-α含量降低,差异有统计学意义(P＜0.05).IL-1β表达:同卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组大鼠血清IL-1β含量显著降低,差异有显著统计学意义(P＜0.01).IL-6表达:与卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组大鼠血清IL-6含量降低,差异有显著统计学意义(P＜0.01);实时荧光定量 PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR)检测各组大鼠海马组织中 HMGB1mRNA 相对表达量:同卡马西平组比较,CBZ+L、CBZ+M、CBZ+H组大鼠海马HMGB1mRNA相对表达量均下降,差异有显著统计学意义(P＜0.01).各组大鼠海马组织中TLR4mRNA相对表达量:同卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组大鼠海马TLR4mRNA相对表达量均下降,差异具有显著统计学意义(P＜0.01),CBZ+L组TLR4mRNA相对表达量下降,差异有统计学意义(P＜0.05);蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)检测各组大鼠海马组织中HMGB1蛋白表达:同卡马西平组相比,CBZ+L、CBZ+M、CBZ+H组大鼠海马HMGB1的蛋白表达量均显著下降,差异具有显著统计学意义(P＜0.01).各组大鼠海马组织中TLR4蛋白表达:与卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组大鼠海马TLR4的蛋白表达量下降,差异具有显著统计学意义(P＜0.01),CBZ+L组大鼠海马TLR4的蛋白表达量下降,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 平肝止痫复方联合卡马西平能降低海人酸难治性癫痫大鼠海马组织HMGB1、TLR4mRNA的相对表达量,显著下调海马组织异常升高的HMGB1、TLR4蛋白表达量;平肝止痫复方联合卡马西平能降低难治性癫痫大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平.提示平肝止痫复方联合卡马西平用药后可通过减少炎症因子释放,抑制胶质细胞活化,减少HMGB1释放,抑制HMGB1/TLR4炎症信号通路的传递,从而减少炎症因子释放,抑制神经元异常兴奋,达到保护神经元,发挥抗癫痫作用.

关键词：癫痫、平肝止痫复方、炎症、HMGB1/TLR4/NF-κB通路

所属期刊栏目：49

分类号：R742.1(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金;黔科合J字号;黔科合基础一般548

在线出版日期：2022-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：191-198,后插8