ABCE1特异性siRNA慢病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建并鉴定ABCE1基因短发夹状干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,以便进一步研究ABCE1的功能.方法 针对已经筛选确定的ABCE1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切后的pRNAT-U6.1/GFP载体连接、转化,产生pLV-sh-ABCE1慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用pLV-sh-ABCE1、pHelper 1.0和pHelper 2.0 3种质粒共转染包装细胞人胚肾293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果 PCR和测序证实,成功构建ABCE1 shRNA的慢病毒载体pLV-sh-ABCE1.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为2×108TU/ML.结论 成功构建ABCE1基因shRNA慢病毒载体,为应用RNAi研究ABCE1功能奠定基础.

关键词：ABCE1、慢病毒载体、RNAi

所属期刊栏目：24

分类号：R734.2;R575;R394.2

在线出版日期：2010-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：64-66