草氨酸钠通过抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老减轻小鼠矽肺纤维化
[背景]肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老是矽肺纤维化进展的重要驱动因素,草氨酸钠对肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老的调节作用尚不清楚.
[目的]探讨乳酸脱氢酶抑制剂草氨酸钠是否可通过抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老减轻小鼠矽肺纤维化.
[方法]本研究分为体内实验和体外实验两部分.体内研究中将40只SPF级雄性C57BL/6J随机分为 4组,每组 10只,实验分组为对照组、矽肺模型组、草氨酸钠低剂量治疗组、草氨酸钠高剂量治疗组.采用一次性气管灌注SiO2 悬浊液 50 μL(100 mg·mL-1)制备矽肺小鼠模型;采用腹腔注射草氨酸钠 100 μL(225 mmol·L-1 和 1125 mmol·L-1)制备草氨酸钠治疗模型.体外研究中采用SiO2 诱导MLE-12小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,实验分组为①不同浓度SiO2 诱导组:对照组、50 μg·mL-1 SiO2 组、100 μg·mL-1 SiO2 组和 200 μg·mL-1 SiO2 组;②草氨酸钠治疗组:对照组、SiO2 组(100 μg·mL-1)、草氨酸钠低剂量(25 mmol·L-1)治疗组和草氨酸钠高剂量(50 mmol·L-1)治疗组.采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学形态;天狼星红染色观察肺组织胶原蛋白沉积;采用免疫荧光染色观察表面活性蛋白C前体(Pro-SPC)和β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的阳性共表达;采用免疫荧光染色观察MLE-12细胞β-galactosidase的阳性表达;采用免疫印迹法检测Ⅰ型胶原(CoL Ⅰ)、纤维连接蛋白 1(FN1)、己糖激酶 2(HK2)、肌肉丙酮酸激酶同工酶 2(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、磷酸化毛细血管扩张性共济失调(p-ATR)、细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂p21和p16的蛋白表达水平.
[结果]与对照组相比较,矽肺模型组和 SiO2 诱导的 MLE-12细胞中,HK2、PKM2、LDHA、p-ATR、p21和p16的蛋白表达水平均上调(P＜0.05).体内研究显示,与对照组相比较,矽肺模型组中,矽结节面积,胶原蛋白沉积面积,β-galactosidase阳性细胞数占比,CoL Ⅰ、FN1、LD-HA、p-ATR、p21和p16的蛋白表达水平均上调(P＜0.05);与矽肺模型组相比较,草氨酸钠治疗组中矽结节面积,胶原蛋白沉积面积,β-galactosidase阳性细胞数占比,CoL Ⅰ、FN1、LDHA、p-ATR、p21和p16的蛋白表达水平均下调,且草氨酸钠高剂量治疗组效果优于草氨酸钠低剂量治疗组(P＜0.05).体外研究显示,与对照组相比较,SiO2 诱导组中,β-galactosidase阳性细胞数占比、p-ATR、p21和p16的蛋白表达水平均上调(P＜0.05);与SiO2 组相比较,草氨酸钠治疗组中β-galactosidase阳性细胞数占比、LDHA、p-ATR、p21和p16的蛋白表达水平均下调,且草氨酸钠高剂量治疗组效果优于草氨酸钠低剂量治疗组(P＜0.05).
[结论]乳酸脱氢酶抑制剂草氨酸钠可通过抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老以减轻小鼠矽肺纤维化.
草氨酸钠、肺泡Ⅱ型上皮细胞、矽肺、衰老、β-半乳糖苷酶
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R114(卫生基础科学)
国家自然科学基金;河北省自然科学基金;河北省高等学校科学技术研究项目;华北理工大学教育教学改革研究与实践项目
2024-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
760-767,779
