原花青素对苯并[a]芘神经毒性的保护作用
[背景]苯并[a]芘(BaP)具有神经毒性,可经氧化应激致神经元损伤.原花青素(PC)具有抗氧化活性,其机制可能核转录因子E2相关因子2(Nrf2)-血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路有关.[目的]探讨PC对BaP诱导的氧化应激致海马神经元损伤的保护作用.[方法]取新生24 h内SD大鼠,分离培养海马神经元,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活性.根据预实验结果设立对照组、10、20、40μmol·L?1的BaP组,免疫荧光法观察各组海马神经元突起的长度及分支数,活性氧(ROS)荧光探针法测定细胞的ROS水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、Western blotting分别检测各组海马神经元Nrf2、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、HO-1、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白质(Bax)的mRNA和蛋白表达.根据预实验结果设立对照组、BaP单独处理组(BaP 20μmol·L?1)、PC干预组(BaP 20μmol·L?1+PC 2.5μg·mL?1),后续实验方法同上.[结果]与对照组相比,10、20、40μmol·L?1 BaP组海马神经元突起长度逐渐变短[(177.60±3.49)、(142.40±6.52)、(100.50±19.40)μm](P<0.05),分支数逐渐减少(8.00±1.00、6.33±1.53、4.33±0.58)(P<0.05);ROS的生成逐渐增加(2.38±0.33、8.08±0.26、9.86±0.19)(P<0.05);qRT-PCR检测结果显示,Nrf2(0.35±0.03、0.25±0.01、0.13±0.03)、Keap1(0.70±0.01、0.47±0.03、0.15±0.02)、HO-1(0.77±0.02、0.60±0.02、0.32±0.01)、Bcl-2(0.65±0.03、0.47±0.02、0.18±0.02)的mRNA表达逐渐降低,Bax(1.24±0.01、2.25±0.15、4.98±0.30)的mRNA表达逐渐升高(P<0.05);Western blotting检测结果显示,Nrf2、Keap1、HO-1、Bcl-2、Bax的蛋白表达变化趋势与mRNA一致.与BaP单独处理组相比,PC干预组突起长度变长,(149.90±3.01)μm vs(202.00±4.45)μm(P<0.05),分支数增加,(4.67±0.58)vs(8.33±0.58)(P<0.05);ROS减少,(10.81±0.63)vs(7.31±0.70)(P<0.05);Nrf2、Keap1、HO-1、Bcl-2的mRNA表达水平增加(P<0.05),Bax的mRNA表达水平减少(P<0.05);Nrf2、Keap1、HO-1、Bcl-2蛋白表达增强(P<0.05),Bax蛋白表达减少(P<0.05).[结论]PC可能通过激活Nrf2-HO-1信号通路,抑制BaP所致的神经元细胞氧化应激损伤,减少细胞毒性,从而发挥神经保护作用.
苯并[a]芘、原花青素、氧化应激、海马神经元细胞、核转录因子E2相关因子2、血红素加氧酶-1
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R114(卫生基础科学)
山西省应用基础研究项目;吕梁市重点研发项目
2023-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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