微小RNA-20a对宫颈癌细胞迁移、侵袭、增殖及ATG7表达的影响

摘要：

目的 探讨微小RNA-20a(miR-20a)对宫颈癌SiHa细胞迁移、侵袭和增殖的影响及可能机制.方法 采用Lipofectamine 2000脂质体法将miR-20a抑制剂和阴性对照载体分别转染SiHa细胞株.采用实时荧光定量PCR (QPCR)检测两组细胞中miR-20a的表达以验证转染效果,细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验及MTT法分别检测miR-20a的表达抑制对SiHa细胞迁移、侵袭和增殖的影响;荧光素酶报告实验及Western blotting验证miR-20a对下游预测靶基因自噬相关蛋白7(ATG7)的调控作用.结果 QPCR检测结果显示,与阴性对照组比较,miR-20a抑制剂组SiHa细胞中miR-20a的表达量显著降低(P＜0.01),证明转染模型构建成功.细胞迁移实验显示,转染48 h后,阴性对照组细胞的划痕愈合率为(75.68±5.94)％,高于抑制剂组的(38.24±7.68)％ (P＜0.01).Transwell细胞侵袭实验显示,转染48 h后,阴性对照组穿膜细胞数为(96.35±10.23)个,多于抑制剂组的(23.54±7.26)个(P＜0.01).MTT法检测显示,阴性对照组和抑制剂组细胞增殖能力的差异无统计学意义(P＞0.05).与阴性对照组相比,转染miR-20a模拟物+ATG7野生型3'UTR报告基因载体的细胞荧光素酶活性显著下降(P＜0.01),而转染miR-20a模拟物+ATG7突变型3'UTR报告基因载体的细胞荧光素酶活性无显著变化(P＞0.05);Western blotting检测显示,与阴性对照组比较,抑制剂组细胞ATG7蛋白表达量显著增加(P＜0.01).结论 降低miR-20a的表达能显著抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力,但细胞增殖能力不受影响,这可能与miR-20a直接作用于其下游靶基因ATG7并调控其表达紧密相关.

关键词：宫颈癌、微小RNA-20a(miR-20a)、迁移、侵袭、增殖、自噬相关蛋白7(ATG7)

所属期刊栏目：23

分类号：R737.33(肿瘤学)

在线出版日期：2018-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：310-315