HIF-2α对胃癌BGC823细胞ERCC1基因调控的实验研究

摘要：

目的 探讨低氧诱导因子-2α(HIF-2α)基因表达对胃癌BGC823细胞切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达的影响.方法 以人HIF-2α基因为模板,突变两个氨基酸位点(P531A、P405A)来构建HIF-2α突变体(HIF-2α-dPA),获得HIF-2α-dPA慢病毒表达载体重组质粒.通过慢病毒感染,建立稳定表达HIF-2α蛋白的BGC823细胞株,采用QPCR、Western blotting检测HIF-2α和ERCC1 mRNA及蛋白的表达.根据人ERCC1基因启动子序列设计引物,扩增人基因组DNA中的ER-CC1启动子,将ERCC1基因启动子插入双酶切pGL3-Basic报告载体后,获得pGL3-Basic-ERCC1-promoter载体重组质粒.重组质粒pGL3-Basic-ERCC 1-promoter转染BGC823细胞24 h后,通过荧光素酶检测ERCC1启动子活性.结果 成功构建HIF-2α蛋白稳定表达的人胃癌BGC823细胞株(HIF-2α-dPA BGC823稳定株),HIF-2α-dPA BGC823稳定株与空质粒转染BGC823细胞、对照质粒转染BGC823细胞相比,HIF-2α mRNA相对表达量上调[(4.50±0.42)vs.(1.42±0.41) vs.(0.99±0.15),P＜0.01],HIF-2α蛋白相对表达量上调[(3.75±0.47)vs.(1.00±0.14)vs.(1.05±0.34),P＜0.01],而ERCC1 mRNA和蛋白相对表达量均无明显上调.成功构建pGL3-Basic-ERCC1-promoter报告基因载体重组质粒.质粒转染至BGC823细胞及HIF-2α-dPABGC823稳定株后,两组ERCC1启动子活性明显高于对照组[(1.01±0.17)vs.(1.25±0.12)vs.(0.02±0.02),P＜0.01],HIF-2α-dPA BGC823稳定株较未经HIF-2α突变处理的BGC823细胞的ERCC1启动子活性没有明显增加.结论 HIF-2α高表达的胃癌BGC823细胞没有促进ERCC1表达的显著变化.HIF-2α过表达的BGC823细胞没有引起ERCC1启动子活性显著增加.因此,HIF-2α是否调控ERCC1基因的表达,仍需进一步深入探讨.

关键词：胃癌、低氧诱导因子-2α(HIF-2α)、切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、慢病毒、启动子、荧光素酶

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分类号：R735.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81760730;青海大学附属医院中青年科研项目基金资助项目ASRF-2014-20

在线出版日期：2018-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：298-304