重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6(E)对耐顺铂卵巢癌细胞增殖与侵袭转移的影响
目的 观察重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6(E)对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞株SKOV3/DDP增殖及侵袭转移的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SKOV3/DDP细胞经融合蛋白处理后的增殖抑制率及采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后融合蛋白对DDP敏感性的影响,单丹磺酰尸胺染色法检测融合蛋白诱导的自噬情况,QPCR和Western blotting检测SKOV3/DDP细胞Beclin 1的表达情况,Transwell体外迁移和重组基底侵袭实验研究融合蛋白对SKOV3/DDP细胞的侵袭和迁移能力.结果 DDP对SKOV3/DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)为(37.62±2.63)μg/ml,10、20、40μg/ml融合蛋白作用后,DDP的IC50分别降低至(17.07±0.88)、(11.08±0.57)和(1.96±0.31) μg/ml(P＜0.001);以3-MA抑制细胞自噬,可阻断融合蛋白诱导SKOV3/DDP细胞对DDP的敏感性;SKOV3/DDP自噬情况的比较:融合蛋白组、融合蛋白+3-MA组的荧光强度分别为824±107、459±128,均高于对照组的306± 143,差异有统计学意义(P＜0.05).Beclin 1 mRNA和蛋白的表达水平随融合蛋白的浓度增加(10、20、40 μg/ml),其表达水平升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).空白对照组、DDP组、融合蛋白组和DDP+融合蛋白组中SKOV3/DDP细胞的Beclin 1蛋白表达亦不同,差异有统计学意义(P＜0.05),其中DDP+融合蛋白组蛋白表达量最高,为0.876±0.023,其次为融合蛋白组的0.564±0.021.融合蛋白能明显抑制SKOV3/DDP细胞的侵袭和迁移能力,DDP+融合蛋白组和融合蛋白组分别与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),DDP组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 融合蛋白可抑制SKOV3/DDP细胞的增殖、侵袭和转移,可能与诱导自噬及上调Beclin 1的表达有关.
卵巢癌、重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6 (E)、细胞自噬、侵袭、迁移、细胞耐药
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R737.31(肿瘤学)
2016-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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