缺氧环境下shRNA下调MTDH基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

摘要：

目的 探讨缺氧环境下MTDH表达下调对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响.方法 ①利用二氯化钴模拟缺氧环境,采用RT-PCR及Western blot法检测HIF-1α及MTDH基因在缺氧环境下表达水平的改变;②缺氧环境下将加入MTDH-shRNA转染质粒的MCF-7细胞(缺氧MTDH-shRNA组)、control-shRNA转染质粒的MCF-7细胞(缺氧Control-shRNA组)及仅予单纯二氯化钴缺氧处理的MCF-7细胞(单纯缺氧组)分别转染,24 h后观察转染率,再应用RT-PCR及Western blot法检测MTDH基因在mRNA和蛋白水平上的变化;③MTT实验检测下调MTDH基因表达对单纯缺氧组、缺氧Control-shRNA组和缺氧MTDH-shRNA组MCF-7细胞增殖的影响,并采用Hoechst33258染色及流式细胞术检测3组细胞的凋亡情况;④采用RT-PCR及Western blot法观察下调MTDH基因对单纯缺氧组、缺氧Control-shRNA组和缺氧MTDH-shRNA组HIF-1α表达的影响.结果 ①缺氧环境下MCF-7细胞HIF-1α基因表达无变化,HIF-1α蛋白表达在一定范围内随缺氧时间延长而升高(P＜0.05),MTDH基因及蛋白表达随缺氧时间延长均逐渐升高(P＜0.05);②MCF-7细胞转染率约60％,与单纯缺氧组和缺氧Control-shRNA组相比,缺氧MTDH-shRNA组MTDH基因及蛋白表达均减低(P＜0.05);③下调MTDH基因表达后,与单纯缺氧组及缺氧Control-shRNA组比较,缺氧MTDH-shRNA组MCF-7细胞增殖抑制率减弱(P＜0.05),凋亡细胞数量增加(P＜0.05);④下调MTDH基因表达后,与单纯缺氧组及缺氧Control-shRNA组比较,缺氧MTDH-shRNA组HIF-1α蛋白表达减低(P＜0.05).结论 缺氧环境下,下调MTDH基因可调控MCF-7细胞HIF-1α蛋白表达,同时降低MCF-7细胞增殖能力,并促进其凋亡.

关键词：转移黏附基因、乳腺肿瘤、缺氧诱导因子1、α亚基、细胞增殖、细胞凋亡

所属期刊栏目：29

分类号：R737.9(肿瘤学)

资助基金：辽宁省科技攻关计划课题20102060

在线出版日期：2016-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：107-113