抗人毛乳头细胞造血干细胞016基因多克隆抗体的制备

摘要：

目的:在大肠杆菌中重组表达人毛乳头细胞造血干细胞(HSPC)016基因功能序列,制备特异性多克隆抗体.方法:采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC 016中扩增出目的基因克隆至pMD18-T载体,酶切回收目的片段连接至表达载体pET-28a(+).重组质粒经酶切及测序鉴定后转化工程菌E.coliBL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对目的蛋白N-端氨基酸测序鉴定后免疫日本大耳白兔,制备兔抗HSPC016多抗血清,以双向免疫扩散、ELISA、Western blotting检测抗体效价及特异性.结果:在大肠杆菌中高效表达了相对分子质量约7 200的HSPC 016蛋白,目的蛋白N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致.双向免疫扩散显示兔抗HSPC 016多克隆抗体效价为1:16;ELISA分析兔抗HSPC 016血清的滴度可达320 000 EU;Western blotting显示抗血清可与原核表达的HSPC 016蛋白特异结合.结论:成功制备了兔抗HSPC 016多抗血清,为进一步研究HSPC 016蛋白的结构与生物学意义奠定了基础.

关键词：人毛乳头细胞、造血干细胞016基因、原核表达、抗体、兔

所属期刊栏目：35

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30200249

在线出版日期：2006-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：563-565