环氧二十碳三烯酸、5-羟色胺与缝隙连接蛋白在慢性缺氧性肺动脉高压形成中的作用
目的 探讨环氧二十碳三烯酸(EET)、五羟色胺(5-HT)、缝隙连接蛋白40(Cx40)和43(Cx43)在慢性缺氧性肺血管收缩所致肺动脉高压中的作用.方法 选择SPF级BALB/c小鼠40只,8周龄,体重25～29 g.实验一:采用随机数字表法将小鼠分为两组:对照组(O组,n=8)和慢性缺氧模型组(H组,n=32).所有小鼠正常饮食,O组在正常环境喂养4周,H组予低氧舱(每天吸入10％氧气10 h)喂养4周后,监测MAP和平均肺动脉压(mPAP).随后处死小鼠,取心肺组织称量并计算右心室肥厚指数.实验二:O组和H组于显微操作下用胶原酶消化法分离远端肺小动脉血管,采用荧光免疫组化法鉴定肺动脉内皮细胞(PAEC)和肺动脉平滑肌细胞(PASMC).采用随机数字表法将H组分离得PAEC和PASMC进一步分为三组:缺氧+si-Cx40组(H40组)、缺氧+si-Cx43组(H43组)和缺氧+无义siRNA组(HN组),H40组和H43组PAEC和PASMC分别接受Cx40基因和Cx43基因的特异性siRNA脂质体siPORTNeoFX转染,HN组接受无义siRNA转染.所有细胞在10％氧气条件下进行传代培养.采用qPCR检测Cx40和Cx43 mRNA表达量,MTT实验检测细胞增殖情况,ELISA法检测EET和5-HT浓度,免疫组织化学法检测PASMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌蛋白-22α(SM22α)和2r骨形态发生蛋白(BMP2r)含量.结果 实验一:H组MAP、mPAP和右心室肥厚指数均明显高于O组(P＜0.05).实验二:与HN组比较,H40组PAEC和PASMC中Cx40 mRNA表达量明显降低(P＜0.05);H43组PAEC和PASMC中Cx43 mRNA表达量明显降低(P＜0.05);H43组和H40组PAEC中EET浓度明显升高(P＜0.05),PASMC中EET和5-HT浓度、α-SMA和SM22α含量明显降低(P＜0.05),PASMC中BMP2r含量明显升高(P＜0.05).与H40组比较,H43组PAEC中EET浓度明显升高(P＜0.05),PASMC中EET和5-HT浓度、α-SMA和SM22α含量明显降低(P＜0.05),PASMC中BMP2r含量明显升高(P＜0.05).结论 PAEC感受缺氧信号,合成分泌增加的EET、5-HT通过Cx40和Cx43转移至PASMC中,促进平滑肌细胞的增殖和收缩蛋白α-SMA、SM22α的表达.通过阻断缝隙连接之间EET、5-HT的转运,有助于减轻缺氧性肺血管收缩和肺动脉高压.
肺动脉高压、缺氧性肺血管收缩、缝隙连接蛋白、环氧二十碳三烯酸、5-羟色胺、慢性缺氧
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R543.202;R799.66;R473.77
南京市科技局项目201803068
2022-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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