一氧化氮对组织特异性溶瘤腺病毒转染膀胱肿瘤细胞的影响
目的:研究一氧化氮(NO)对肿瘤组织特异性溶瘤病毒转染过程的影响及对外源基因表达的调节作用.方法:构建组织特异性溶瘤腺病毒,常规培养膀胱肿瘤BIU 87和5637细胞株,以硝普钠作为外源性NO的供体.应用PTIO和L-NMMA分别作为内源性NO的清除剂和诱导型-氧化氮合酶(NOS)的抑制剂.采用Nitrate/Nitrite Assay Kit检测NO和(或)病毒作用前后膀胱肿瘤细胞培养液中的NO水平.应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测NO对重组病毒抗肿瘤细胞增殖的影响；透射电镜观察腺病毒颗粒进入细胞情况和亚细胞结构变化.结果:膀胱肿瘤细胞BIU-87和5637本身培养液中NO水平很低,给予外源性NO供体后NO水平随时间延长而升高.重组病毒Ad-UPⅡE1A能通过E1A基因发挥溶瘤作用.NO能够促进该病毒转染入BIU-87、5637细胞.50 μmol/L和100μmol/L的NO联合Ad-UPⅡE1A 30 MOI作用后能够促进肿瘤细胞的增殖,而200 μmol/L的NO联合重组腺病毒作用后则促进肿瘤细胞的死亡.NO对Ad UPⅡ-E1A的作用具有时间依赖性.透射电镜观察发现,重组病毒Ad-UPⅡ-E1A能够进入并在膀胱肿瘤细胞内复制,而NO能够提高病毒的转染效率并引起肿瘤细胞自吞噬和凋亡.结论:NO能够促进溶瘤腺病毒Ad UPIIE1A转染膀胱肿瘤细胞的效率,但NO因其浓度不同对溶瘤腺病毒的溶瘤效果具有双向调节作用,低剂量的NO能够下调重组病毒E1A的表达从而促进肿瘤细胞增殖,而高剂量的NO通过上调E1A的表达因而发挥溶瘤效应.
膀胱肿瘤、一氧化氮、溶瘤腺病毒、基因治疗
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R737.14(肿瘤学)
国家自然科学基金项目30800206/C050605;兰州大学中央高校基本科研业务费专项资金资助lzujbky-2009-103
2013-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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