CHFR介导的蛋白PAR化参与肝纤维化DNA损伤应答的分子机制研究

摘要：

目的 探讨泛素连接酶蛋白(CHFR)介导的蛋白PAR化参与肝纤维化DNA损伤应答的分子机制.方法 制备和野生型C57BL/6小鼠同背景的CHFR基因敲除(CHFR-/-)小鼠构建四氯化碳肝纤维化(CCl 4)模型,饲养4周后处死,通过免疫组化方法以及Western blotting方法验证小鼠肝纤维模型中DNA的损伤标记物 γH2AX表达变化以及对小鼠肝星状细胞(HSC)进行激光照射诱导DNA双链断裂(DSBs)损伤,在荧光显微镜下观察CHFR和 γH2AX的定位,采用shRNA降低小鼠HSC中CHFR蛋白表达,进行放射线照射后,进行单细胞凝胶电泳(Comet)实验.结果 ①Western blotting和免疫组化结果均显示,正常肝组织中未见 γH2AX,肝纤维化组织表达明显;②荧光显微镜下显示,HSC细胞核出现 γH2AX与CHFR荧光表达,CHFR显著定位于DNA损伤部位,且CHFR与 γH2AX表达趋势一致,同时表达于细胞核相同部位;③与野生型C57BL/6小鼠对比,CHFR-/-小鼠 γH2AX阳性细胞数明显增多,放射线照射后,CHFR-/-小鼠"彗星尾巴"增加,DNA修复减弱.结论 CHFR可能通过参与DNA损伤修复过程介导HSC活化继而参与肝纤维过程.

关键词：小鼠、肝纤维化、CHFR、肝星状细胞、DNA双链断裂

所属期刊栏目：18

分类号：R73;R96

资助基金：北京市自然科学基金19G11095

在线出版日期：2019-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2577-2580