TLR4对ox-LDL作用后的血管内皮细胞ROS及线粒体膜电位的影响

摘要：

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作用后的血管内皮细胞活性氧(ROS)及线粒体膜电位的影响.方法 用qRT-PCR和Western blot分别测定ox-LDL作用后的血管内皮细胞中TLR4 mRNA和蛋白水平.在血管内皮细胞中转染TLR4小干扰RNA和小干扰RNA阴性对照,qRT-PCR和Western blot分别测定血管内皮细胞中TLR4 mRNA和蛋白水平.用ox-LDL作用转染以后的血管内皮细胞,流式细胞术测定细胞凋亡情况,荧光素酶基因报告系统测定三磷酸腺苷(ATP)含量,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法测定ROS含量,JC-1法测定线粒体膜电位,Western blot测定细胞浆及线粒体中细胞色素C(Cytochrome C)蛋白水平.结果 ox-LDL作用后的血管内皮细胞中TLR4 mRNA和蛋白水平均明显高于未经处理的细胞(P<0.05).TLR4小干扰RNA转染以后的细胞中TLR4 mRNA和蛋白水平均明显低于未经转染的细胞(P<0.05),而转染小干扰RNA阴性对照后细胞中mR-NA和蛋白水平与未经转染的细胞相比没有明显变化(P>0.05).ox-LDL处理以后的细胞凋亡增多,细胞线粒体膜电位和ATP水平降低,细胞中ROS水平升高,线粒体中Cytochrome C蛋白减少,胞浆中Cytochrome C蛋白增多,与未经处理的细胞相比差异有统计学意义(P<0.05).下调TLR4后的血管内皮细胞经ox-LDL处理以后,细胞凋亡率降低,线粒体膜电位和ATP水平升高,细胞中ROS水平降低,线粒体中Cytochrome C蛋白增多,胞浆中Cytochrome C蛋白减少,与单纯ox-LDL处理的细胞相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TLR4表达下调后可以提高ox-LDL处理后血管内皮细胞线粒体膜电位,促进细胞ATP合成,减少细胞中ROS的积累,减少线粒体中Cytochrome C蛋白的释放,减少线粒体损伤,减少细胞凋亡发生.

关键词：血管内皮细胞、Toll样受体4、线粒体损伤

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在线出版日期：2018-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1153-1158