ADMA 可以通过自噬引起内皮细胞死亡

摘要：

目的：探讨非对称性二甲基精氨酸（ADMA）在体外培养的条件下，是否可以通过自噬引起脐静脉内皮细胞死亡。方法首先，将细胞分为阴性对照组，ADMA（25μmol/ L），ADMA（50μmol/ L），ADMA（100μmol/ L）及阳性对照组雷帕霉素（RAPA，自噬的激动剂，20 nmol/ L）刺激人脐静脉内皮细胞24 h。然后应用 ADMA（100μmol/ L）分别刺激人脐静脉内皮细胞0 h，12 h，24 h，36 h，48 h。最后引入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3- MA，5 mmol/ L），分为阴性对照组，ADMA （100μmol/ L），3- MA（5 mmol/ L）和 ADMA ＋3- MA（100μmol/ L ADMA ＋5 mmol/ L 3- MA）。免疫印迹方法检测微管相关蛋白Ⅰ轻链3（LC3Ⅱ/Ⅰ）和酵母自噬相关基因 Atg6的哺乳动物同源基因 beclin -1的表达水平；实时荧光定量方法检测 be-clin -1的 mRNA 表达水平；应用流式细胞仪检测细胞死亡。结果随着 ADMA 浓度的增加，脐静脉内皮细胞内的 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和 beclin -1的表达增加（ P ﹤0.05），细胞死亡的百分比也逐渐增加（ P ﹤0.05）。在 ADMA 浓度为100μmol/ L 时，随着时间的延长，脐静脉内皮细胞内的 LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ和 beclin -1的表达增加（ P ﹤0.05），细胞死亡的百分比也逐渐增加（ P ﹤0.05）。在 ADMA（100μmol/ L）的基础上应用自噬抑制剂3- MA 后，脐静脉内皮细胞内的 LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ和 beclin -1的表达较 ADMA 组减低（ P ﹤0.05），同时加入3- MA 后细胞死亡的百分比较 ADMA 组减低（ P ﹤0.05）。结论 ADMA 可以引起人脐静脉内皮细胞发生自噬，自噬的强度具有浓度及时间的依赖性，并可以通过自噬引起人脐静脉内皮细胞的死亡，当应用自噬抑制剂后可以减少这种由于 ADMA 所致细胞自噬引起的细胞死亡，这说明 ADMA 可以通过自噬引起内皮细胞死亡，从而引起内皮损伤，这可能是引起内皮功能不全的机制之一。

关键词：非对称二甲基精氨酸、自噬、内皮细胞死亡

分类号：R73;R3

资助基金：北京市自然科学基金BJNSF资助项目7132091；北京市科学技术委员会基金资助项目D09050704310903；博士学科点专项科研基金的高等教育资助项目SRFDP20101107120003;北京友谊医院院启动基金资助项目YYQD2011-17

在线出版日期：2014-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1045-1048,1049