基于qPCR的循环miRNA定量检测的方法探讨

摘要：

目的 探讨和优化循环miRNA检测方法,为进一步研究循环miRNA作为生物标记物提供方法学基础.方法 以miR-16和miR-21为检测目标,通过实时PCR的方法检测其表达量.比较传统Trizol法和miRNA提取试剂盒的miRNA提取效率;比较血清和血浆中miRNA含量;并对基于实时定量PCR(qPCR)的循环miRNA检测方法重复性和敏感性进行评价.结果 miRNA提取试剂盒的miRNA提取效率是传统Trizol法的16 435倍;血浆中miR-16和miR-21qPCR检测的Ct值为25.75±1.83、25.69±2.04,而血清miRNA检测Ct值为27.82±1.03、27.12±1.35,两者相比有显著差异;同一批血浆miR-16两次检测相关系数为0.8885,单个血浆样本10倍梯度稀释后Ct值拟合系数0.9865.结论 Trizol法提取循环miRNA效率低,血浆中miRNA含量较血清稍高,建议选取血浆为标本,通过miRNA提取试剂盒提取miRNA,然后行实时PCR检测其表达,该法具有较高的重复性和敏感性.

关键词：血清miRNA、血浆miRNA、实时定量PCR

所属期刊栏目：11

分类号：R39;R73

在线出版日期：2012-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：503-505