Smad3 shRNA抑制TGFβ1对HSC - T6细胞活化的抗肝纤维化作用

摘要：

目的 观察Smad3 shRNA对TGFβ1作用于大鼠HSC - T6细胞增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化胶原的影响.方法 Smad3 shRNA慢病毒感染HSC - T6,应用流式细胞仪检测其感染率,Real - time PCR检测对Smad3 mRNA表达的抑制作用；将HSC-T6对照、HSC - T6+ TGFβ1( 10 ng/ml)、Smad3 shRNA以及Smad3 shRNA+TGFβ1( 10 ng/ml)这4组细胞进行如下检测:(1)MTT检测细胞增殖；(2)流式细胞仪检测TGFβ1作用24、36 h细胞周期分布；(3)Real -time PCR检测24、36 h时细胞周期、增殖及肝纤维化相关基因mRNA的表达变化；(4)ELISA检测24、36 h培养液上清中胶原蛋白(COL)Ⅰ、COLⅢ及α- SMA的含量.结果 Smad3 shRNA慢病毒感染HSC - T6细胞至96h,感染率为71.3％,对Smad3 mRNA的表达抑制率为50％.(1) MTT结果显示,TGFβ1促进HSC - T6增殖；与相应未感染Smad3shRNA病毒组相比,Smad3 shRNA组以及Smad3 shRNA +TGFβ1组细胞增殖能力均下降.(2)细胞周期检测发现,24、36 h时,Smad3 shRNA+ TGFβ1组与Smad3 shRNA组相比,细胞周期分布差异无统计学意义(P＞0.05)；(3) Real - time PCR显示,Smad3 shRNA+ TGFβ1组较HSC - T6+ TGFβ1组,Smad3、原癌基因(c- myc)、细胞周期依赖性激酶-2(CDK-2)、细胞周期素E(cyclin E)、表皮生长因子(EGF)、核因子- κB( NF - κB)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、COLI及基质金属蛋白酶(MMP) 14等基因的mRNA在24、36 h表达均下调,HGF mRNA及COLⅢmRNA在24h时上调、36 h时下调,Bcl -2 mRNA、MMP1 mRNA及MMP9mRNA在24h和36 h两个时段均表达上调.(4) ELISA检测发现,同一时间点比较,分别在24、36 h,TGFβ1可促进HSC - T6细胞COL Ⅰ (P=0.00,P=0.02)、α- SMA( P =0.00,P=0.01)的分泌；与HSC -T6+TGFβ1组相比,Smad3 shRNA+ TGFβ1组COL Ⅰ于36 h分泌减少(P=0.00)、而α- SMA在24、36 h两个时间点分泌减少(P=0.00).结论 Smad3 shRNA抑制了TGFβ1对HSC - T6的活化,显示了抗肝纤维化作用.

关键词：Smad3 shRNA、慢病毒载体、肝硬化、转化生长因子β1、肝星状细胞

所属期刊栏目：28

分类号：R575.2(消化系及腹部疾病)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30800979;北京自然科学基金资助项目7102085;北京市科技新星资助项目2007B055;北京市卫生系统高层次卫生人才培养计划2011-3-083;北京市教育委员会科技发展计划项目KM201010025024

在线出版日期：2013-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：289-295