丙型肝炎病毒多CTL表位树突状细胞疫苗的构建及体外刺激T细胞应答

摘要：

目的 构建丙型肝炎病毒(HCV)多细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位树突状细胞(DC)疫苗,观察其体外刺激的T细胞反应,为下一步做体内免疫实验提供一定的资料.方法 构建和制备出含绿色荧光蛋白(GFP)标签的HCV两个CTL表位的重组腺病毒,感染DC,直接在荧光显微镜下或用流式细胞仪检测其感染率;RT-PCR和Western Blot方法检测HCV多CTL表位的表达.流式细胞术分析感染前后DC的CD80、CD83、CD86和人类白细胞抗原(HLA)-DR的表达,CCK-8法观察感染重组腺病毒的DC促进T细胞的增殖效应.ELISA检测重组腺病毒刺激后的DC培养上清液内白细胞介素(IL)-12及DC和T细胞混合培养上清液内干扰素(IFN)-γ的含量.用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL的杀伤活性.结果 成功构建含GFP标签的HCV多CTL表位的重组腺病毒,并在DC中表达.重组腺病毒能促进DC成熟,DC的CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达分别为(71.19±3.29)%、(81.21±5.07)%、(91.23±4.24)%、(97.95±5.31)%.感染DC后促进同源T细胞增殖,DC:T为1:10时增殖指数为6.806±0.247.分泌的IL-12和IFN-γ也明显增多,分别达到(193.83±6.25)pg/ml和(111.14±2.09)pg/ml.感染DC刺激的CTL能特异性杀伤转染FL-J6/JFH的Huh-7.5细胞,当效靶比为100:1时,ADI-DC-L的杀伤率为35.99%.结论 重组多CTL表位腺病毒在体外能有效感染DC,促进了T细胞反应,为下一步抗HCV的DC疫苗研制打下基础.

关键词：肝炎病毒属、表位、树突细胞、病毒性肝炎疫苗、T淋巴细胞、细胞毒性

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分类号：R512.6+3(传染病)

资助基金：国家"863"计划专题项目2007AA02Z441;国家"十一五"重大传染病防治专项2009ZX10004-715

在线出版日期：2013-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：40-44