适用于结核分枝杆菌微测序耐药基因芯片的多重PCR体系的优化与评价

摘要：

目的 优化结核分枝杆菌耐药相关基因多重PCR反应体系并评估其优缺点.方法 利用改进的方法提取结核分枝杆菌基因组DNA,优化适合扩增rpoB,katG,mabA/inhA,pncA,embB,gyrA,rpsL,rrs和eis耐药基因片段的多重PCR体系,经测序确定所扩增出的基因片段,计算PCR操作过程所用的时间和材料成本等,分析多重PCR反应体系存在的优缺点.结果 经过优化煺火温度、引物浓度以及添加NH4+和二甲基亚砜可以较好的扩增出5重和4重PCR产物,达到两管同时扩增9个结核分枝杆菌耐药相关基因的目的.利用该条件可以扩增出全部培养出的135株菌株DNA样本和80.56％的痰菌DNA样本,并且可以缩短PCR操作时间、降低试剂耗材成本,减少操作失误.结论 优化的两管多重PCR法在同时扩增9个结核分枝杆菌耐药相关基因,具有明显的优势,具有良好的实用价值.

关键词：结核病、结核分枝杆菌、耐药、基因、多重PCR

所属期刊栏目：25

资助基金：北京市医院管理局临床医学发展专项经费XMLX201812;首都卫生发展科研专项首发2018-2Z-1042

在线出版日期：2020-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：163-166