活动性肺结核患者PBMCs实时定量PCR内参基因的选择

摘要：

目的 筛选适用于活动性肺结核患者PBMCs的内参基因.方法 用密度梯度离心方法分离活动性肺结核患者PBMCs,然后使用结核分枝杆菌 H37Rv裂解液、CFP-10 和 ESAT-6 多肽库、共刺激因子CD28共孵育,或者不添加任何刺激物,培养过夜后收集细胞;使用Trizol提取mRNA,逆转录获得cDNA,然后用6个常用的内参基因ACTB、B2M、DDX5、GAPDH、YWHAZ和18sRNA的特异性引物进行实时定量PCR检测,结果用geNorm 、NormFinder和Bestkeeper软件进行数据分析.结果 18sRNA基因丰度太高,在PBMCs表达不稳定,DDX5、YWHAZ和B2M的稳定最好,适合作为活动性肺结核患者PBMCs的内参基因,而ACTB和GAPDH稳定性略低.结论 筛选出稳定的内参基因DDX5、YWHAZ和B2M,可用于活动性肺结核患者PB-MCs基因表达分析.

关键词：内参基因、实时定量PCR、结核、外周血单个核细胞

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资助基金：国家自然科学基金1302537;国家博士后科学基金013M532187

在线出版日期：2018-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1941-1945,1958