结核分枝杆菌组合蛋白的表达及血清学诊断价值的评价

摘要：

目的 取得能用于结核病血清学诊断的敏感性、高特异性强的组合蛋白.方法 用DNA双链全合成的方法合成ESAT6,MPT64,38KD,Ag85B等结核分枝杆菌特异性抗原的抗原表位基因,用PCR法将这些基因片段连接起来成为新型抗原的编码基因.将该编码基因克隆于pET24b载体,经测序鉴定后转化于大肠杆菌BL21菌株用IPTG进行诱导表达.组合蛋白经镍柱纯化后用Western印迹法和酶联免疫实验(ELISA)对其抗原性和特异性进行检测.结果 携带重组质粒的菌株经IPTG诱导后以包涵体的形式大量表达组合蛋白,经镍柱纯化后蛋白质浓度达到0.5 mg/ml,western实验表明:该组合蛋白能与结核病人血清特异性结合,而不与健康人血清结合.以该组合蛋白为包被抗原采用ELISA法检测结核抗体的灵敏度为61%,特异性为97.3%.PPD检测的灵敏度和特异性分别为73.7%和91.8%.该组合蛋白检测卡介苗接种阳转血清的阳性率为2.1%,特异性为97.9%,而PPD检测卡介苗接种阳转血清的阳性率为22.3%,特异性为79.7%.结论 该组合蛋白用于结核病血清学诊断具有较高的灵敏度和特异性,能够为结核病的临床诊断提供一定的指导.

关键词：组合蛋白、抗原决定簇、克隆表达

所属期刊栏目：18

分类号：S85;R73

在线出版日期：2013-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：97-99