结核分枝杆菌PE35在大肠杆菌中的可溶性表达及产物纯化

摘要：

目的 利用大肠杆菌表达系统大量获得重组的结核分枝杆菌PE35蛋白,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值.方法 用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv全基因组中获得PE35基因克隆到pET24b中,转化BL21(DE3)构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定重组蛋白及其表达方式;使用Ni-sepharose纯化蛋白;Western-blot检测结核病人血清的抗结核抗体.结果 酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的pET-PE35原核表达载体,并能在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性地表达分子量大小相符的重组蛋白.纯化后的蛋白纯度达到90%以上,能与结核病人血清抗体结合.结论 成功地构建了pET-PE35原核表达载体,并获得较纯的重组PE35蛋白,此蛋白能检测结核病人血清抗体.为探讨PE35蛋白在结核病的基础研究与诊断运用奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌、PE35、可溶性表达、纯化

所属期刊栏目：15

分类号：Q78;R37

资助基金：国家重大传染病专项基金资助项目2008ZX10003-012

在线出版日期：2011-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1709-1711